Kimyasal Olarak Bağlanmış Antikor-Antijen Konjugatlarını Doğrulamak için Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi

Bir bağışıklık tepkisi ortaya çıkarmak için, antijenler, dendritik hücrelerin yüzeyinde bulunan endositik reseptörlere veya antijenlerin alımına yardımcı olan DC'lere (antijen sunan hücreler) özgü antikorlara bağlanır.

Bir antikor-antijen kompleksinin oluşumu çok önemli bir adımdır ve antijenin DC hedefli bir monoklonal antikora kimyasal olarak bağlanmasıyla in vitro olarak gerçekleştirilebilir.

Konjugasyon işleminin verimliliğini doğrulamak için, yakalanan antikorlarla önceden kaplanmış bir ELISA plakası ile başlayın. Antijenlerin kaplanmış yüzeye spesifik olmayan bağlanmasını önlemek için plakayı bir bloke edici çözelti ile muamele edin.

Plakaya kimyasal olarak çapraz bağlanmış, antikor-antijen konjugatları ekleyin ve inkübe edin. Antijenin spesifik epitopu, yakalanan antikorun paratopu ile etkileşime girerek bir antikor-antijen-antikor kompleksi oluşturur.

Daha sonra, plakayı bir enzime bağlı üçüncü bir antikor seti ile kaplayın. Bu antikorlar, konjugatta bulunan birincil antikorlara spesifik olarak bağlanarak tespit edilmesini sağlar.

Konjugatları görselleştirmek için kromojenik substratı içeren bir tampon ekleyin. Antikora bağlı enzim, substrat ile reaksiyona girerek renkli ür