JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:19 dk. • July 8th, 2025
Zararlı ajanlara maruz kalmak, hücresel DNA'da tek ve çift sarmallı kırılmalara neden olur ve bu da DNA hasarına yol açar.
DNA hasarını tespit etmek için, sıvılaştırılmış, düşük erime noktalı agarozda kimyasal olarak işlenmiş hücrelerin tek hücreli bir süspansiyonu ile başlayın. Süspansiyonu bir cam slayt üzerine yükleyin ve agarozun katılaşmasına izin verin - gözenekli jel matrisi içindeki hücrelerin hareketsiz hale getirilmesini sağlar.
Hücreleri lizis tamponu ile tedavi edin. Tampondaki deterjanlar, hücresel ve nükleer zarları çözündürürken, tuzlar histonları DNA'dan uzaklaştırır ve nükleer matrise bağlı DNA içeren bir nükleoid gövde oluşturur.
Slaytları bir alkalin elektroforez tamponunda inkübe edin. Bu, DNA'nın gevşemesine ve tek sarmallı parçalar oluşturmasına neden olur. Sürgüyü bir elektroforez aparatına yerleştirin ve güç kaynağına bağlayın. Bu, negatif yüklü DNA'nın pozitif anoda doğru göçüne izin verir.
Hasar görmemiş DNA, nükleoid cisim içinde sınırlı kalır. Buna karşılık, daha küçük, hasar görmüş DNA parçaları anoda doğru hareket etmeye başlar. Bu diferansiyel hareket, hasar görmemiş DNA'nın kafayı oluşturduğu, hasarlı DNA'nın ise kuyruklu yıldızın kuyruğunu oluşturdu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin