JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:04 dk. • July 8th, 2025
Amino asit taşıyıcıları, hücre zarları boyunca amino asit transferine aracılık eden ve hayati hücresel süreçleri düzenleyen zara bağlı proteinlerdir.
Amino asit alımını in vitro olarak incelemek için, fare kemik iliğinden türetilmiş stromal hücrelerin bir kültürünü alın. Büyüme ortamını aspire edin. Radyoaktif hidrojen ile etiketlenmiş bir amino asit olan glutamin ile desteklenmiş önceden ısıtılmış bir tampon ekleyin. İstenilen süre boyunca kuluçkaya yatırın.
Önceden ısıtılmış tampon, glutaminin hücresel alımı için gerekli olan fizyolojik sıcaklığı ve uygun bir pH'ı sağlar. Glutamin taşıyıcıları, sodyum iyonu bağlı ko-taşıma yoluyla substrat translokasyonundan sorumlu olan taşıma alanlarından ve membran bağlantılı iskele alanlarından oluşur.
Taşıma alanı, tampondan gelen sodyum iyonları ile birlikte radyoaktif işaretli glutamine bağlanır. Bağlandıktan sonra molekülleri sitoplazmaya bırakır. Eşzamanlı olarak, taşıma alanı, hücre içi sodyum iyonlarını ve nötr amino asitleri hücre dışına taşır ve bu da hücresel homeostaz ile sonuçlanır.
Hücreleri buz gibi soğuk tamponla yıkayın, reaksiyonu sonlandırın ve hücre dışı radyoaktif işaretli glutamini çıkarın. Bir deterjan çözeltisi ekleyin.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin