Test Numunelerinde Laktat Miktarının Belirlenmesi için Kolorimetrik Test

Canlı hücrelerde, anaerobik koşullar altında, laktat dehidrojenaz enzimi, glikolizin bir son ürünü olan piruvatı, önemli bir metabolit olan laktata dönüştürür. Hücrelerde üretilen laktat miktarı, metabolik durumlarını yansıtır.

Hücre içi laktat konsantrasyonunu ölçmek için, protein içermeyen, nematod hücre lizatının bir test numunesi ile başlayın. Çok kuyulu bir plakanın diğer kuyucuklarını, bilinen çeşitli konsantrasyonlarda bir laktat çözeltisi ile destekleyin.

Lizat, endojen laktat dehidrojenaz da dahil olmak üzere tüm proteinli enzimlerden yoksundur ve doğru laktat miktar tayinini sağlar.

Optimum enzimatik aktivite için uygun pH'ı korumak için her oyuğa bir laktat tahlil tamponu ekleyin. Kuyucukları laktat dehidrojenaz enzimi, nikotinamid-adenin dinükleotid - NAD - bir koenzim ve bir kolorimetrik prob içeren bir reaksiyon karışımı ile destekleyin ve inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, laktat dehidrojenaz, hücresel laktatın piruvata oksidasyonunu katalize eder ve aynı anda NAD'nin NADH'ye indirgenmesi ile katalize eder. Üretilen NADH, mor bir ürün üretmek için kolorimetrik prob ile reaksiyona girer.

Test numunesi için mor çözeltinin absorbansını ve 570 nanometrede laktat standart