Test Numunelerinde Laktat Miktarının Belirlenmesi için Kolorimetrik Test

0 views • 3:08 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Canlı hücrelerde, anaerobik koşullar altında, laktat dehidrojenaz enzimi, glikolizin bir son ürünü olan piruvatı, önemli bir metabolit olan laktata dönüştürür. Hücrelerde üretilen laktat miktarı, metabolik durumlarını yansıtır.

Hücre içi laktat konsantrasyonunu ölçmek için, protein içermeyen, nematod hücre lizatının bir test numunesi ile başlayın. Çok kuyulu bir plakanın diğer kuyucuklarını, bilinen çeşitli konsantrasyonlarda bir laktat çözeltisi ile destekleyin.

Lizat, endojen laktat dehidrojenaz da dahil olmak üzere tüm proteinli enzimlerden yoksundur ve doğru laktat miktar tayinini sağlar.

Optimum enzimatik aktivite için uygun pH'ı korumak için her oyuğa bir laktat tahlil tamponu ekleyin. Kuyucukları laktat dehidrojenaz enzimi, nikotinamid-adenin dinükleotid - NAD - bir koenzim ve bir kolorimetrik prob içeren bir reaksiyon karışımı ile destekleyin ve inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, laktat dehidrojenaz, hücresel laktatın piruvata oksidasyonunu katalize eder ve aynı anda NAD'nin NADH'ye indirgenmesi ile katalize eder. Üretilen NADH, mor bir ürün üretmek için kolorimetrik prob ile reaksiyona girer.

Test numunesi için mor çözeltinin absorbansını ve 570 nanometrede laktat standartlarını spektroskopik olarak ölçün. Laktat standartlarının absorbans değerlerini çizin ve kalibrasyon eğrisini oluşturun.

Son olarak, test numunesinde bulunan laktat miktarını belirlemek için numunenin absorbans değerini laktat standartlarıyla karşılaştırın.

Laktat konsantrasyonunu ölçmek için, test numuneleri için mükerrer analiz yapmak üzere bir kolorimetrik tahlil kiti kullanın. 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 10 mikrolitre test numunesi ekleyin ve ardından hacmi 50 mikrolitreye ayarlamak için her numuneye laktat tahlil tamponu ekleyin.

100 milimolar L (+) - Laktat standardını laktat test tamponu ile 1 milimolar ila seyreltin. Daha sonra, bir dizi oyuğa 0, 2, 4, 6, 8 ve 10 mikrolitre seyreltilmiş L (+) - Laktat standardı ekleyin. Her bir oyuğa 50 mikrolitre reaksiyon karışımı ekleyin ve rengin gelişmesi için en az 30 dakika ışıktan korunarak oda sıcaklığında inkübe edin.

Son olarak, her bir oyuğun emilimini 570 nanometrede ölçmek için bir mikroplaka okuyucu kullanın. Arka plan kontrol karışımının absorbansını reaksiyon karışımının absorbansından çıkarın. Ardından, laktat standart eğrisini çizin ve her konsantrasyonu 2.25 ile çarparak eğriden laktat konsantrasyonlarını hesaplayın.

08:57

Süperoksit/hidrojen peroksit ve NADH üretim mitokondriyal Dehydrogenases Flavin içeren tarafından eş zamanlı ölçüm

Related Videos

0 Views

06:18

Eşleme metabolizma: doğrudan dokusunda laktat dehidrogenaz etkinliğini izleme

Related Videos

0 Views

04:33

Memeli Hücrelerinde Toplu Otofajik Sekestrasyon Aktivitesinin Ölçülmesi

Related Videos

0 Views

03:04

Modifiye Turnusol Testi Kullanılarak Bakteriyel Bir Biyobelirteçin Kolorimetrik Tespiti

Related Videos

0 Views

06:47

Ekstraselüler Asit Üretim Ölçüm ve Analiz Glikolitik Hızı belirleme

Related Videos

0 Views

04:41

Laktaz enzim etkinliğin ölçülmesi öğretim laboratuarında

Related Videos

0 Views

10:05

Turnusol Testi kullanarak Bakterilerin Kolorimetrik Tespiti

Related Videos

0 Views

10:44

Kütle Spektrometre ve lüminojenik tabanlı Yaklaşımlar Faz I Metabolik Yetkinlik ait Characterize İn Vitro Hücre Kültürleri

Related Videos

0 Views

09:35

Küçük ölçekli Renkölçer deneyleri, intrasellüler laktat ve Pyruvate nematodunun Caenorhabditis elegans içinde

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026