JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:29 dk. • July 8th, 2025
Enerji üreten biyokimyasal yollarda önemli bir ara madde olan piruvatın hücresel seviyeleri, enzim bazlı kolorimetrik testler kullanılarak tahmin edilebilir.
Parazitik olmayan bir nematod olan Caenorhabditis elegans hücrelerindeki piruvat seviyelerini belirlemek için, piruvat içeren yetişkin solucanlardan hazırlanan bir hücresel fraksiyon alın. Çözeltiyi tedavi edin, hücresel proteinleri çıkarın ve piruvat içeren arıtılmış hücresel fraksiyonu - test numunesi - toplayın. Hücresel proteinlerin yokluğu, piruvat seviyelerinin doğru bir şekilde belirlenmesini sağlar.
Piruvat oksidaz ve yaban turpu peroksidaz enzimlerini içeren çalışan bir reaktif ve kromojenik bir boya ekleyerek başlayın. Karışımı karanlıkta yeterli bir süre inkübe edin.
İnkübasyon sırasında, piruvat oksidaz, substratı olan piruvat ile reaksiyona girer ve bir yan ürün olarak hidrojen peroksit üretir. Işığın olmaması, hidrojen peroksitin kendiliğinden ayrışmasını önler.
Yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ile kromojenik boya arasındaki reaksiyonu katalize ederek renkli bir ürün üretir. Renkli reaksiyon ürününün yoğunluğu, numunedeki piruvat konsantrasyonu ile doğru orantılıdır.
Kuluçka süresinin tamamlanmasının ard
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin