Solucanların Hücresel Fraksiyonlarında Piruvat Seviyelerinin Tahmini için Piruvat Testi

0 görüntüleme2:29 dk • July 8th, 2025

Enerji üreten biyokimyasal yollarda önemli bir ara madde olan piruvatın hücresel seviyeleri, enzim bazlı kolorimetrik testler kullanılarak tahmin edilebilir.

Parazitik olmayan bir nematod olan Caenorhabditis elegans hücrelerindeki piruvat seviyelerini belirlemek için, piruvat içeren yetişkin solucanlardan hazırlanan bir hücresel fraksiyon alın. Çözeltiyi tedavi edin, hücresel proteinleri çıkarın ve piruvat içeren arıtılmış hücresel fraksiyonu - test numunesi - toplayın. Hücresel proteinlerin yokluğu, piruvat seviyelerinin doğru bir şekilde belirlenmesini sağlar.

Piruvat oksidaz ve yaban turpu peroksidaz enzimlerini içeren çalışan bir reaktif ve kromojenik bir boya ekleyerek başlayın. Karışımı karanlıkta yeterli bir süre inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, piruvat oksidaz, substratı olan piruvat ile reaksiyona girer ve bir yan ürün olarak hidrojen peroksit üretir. Işığın olmaması, hidrojen peroksitin kendiliğinden ayrışmasını önler.

Yaban turpu peroksidaz, hidrojen peroksit ile kromojenik boya arasındaki reaksiyonu katalize ederek renkli bir ürün üretir. Renkli reaksiyon ürününün yoğunluğu, numunedeki piruvat konsantrasyonu ile doğru orantılıdır.

Kuluçka süresinin tamamlanmasının ardından, numuneyi bir plaka okuyucunun içine yerleştirin ve emilimini ölçün. Bilinen piruvat konsantrasyonları ile seri bir seyreltme kullanarak standart bir eğri oluşturun.

Test numunesindeki piruvat konsantrasyonunu belirlemek için test numunesinin ölçülen absorbans değerini eğri üzerinde çizin.

Test numunelerindeki piruvat konsantrasyonunu ölçmek için bir kolorimetrik tahlil kiti kullanın ve çift yönlü incelemeler yapın.

96 oyuklu bir plakanın farklı oyuklarına 10 mikrolitre test numunesi ekleyin ve her numuneye 90 mikrolitre çalışma reaktifi ekleyin. Oda sıcaklığında 30 dakika kapalı olarak inkübe edin. Ardından, her bir oyuğun emilimini 570 nanometrede ölçmek için plakayı bir mikroplaka okuyucusuna yerleştirin.

Piruvat standart eğrisini çizin ve her konsantrasyonu 2.25 ile çarparak standart eğriden piruvat konsantrasyonlarını hesaplayın.

11:43

hyperpolarized 13 C Metabolik Manyetik Rezonans Spektroskopisi ve Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:30

Drosophila Melanogaster'de Sitrat Synthase Aktivitesinin Kolorimetrik Tsöplini

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:34

Updegraff Yöntemi Kullanılarak Bitki Biyokütlesinin Kristal Selüloz İçeriğinin Tahmini

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:10

Kararlı İzotopik Profil geliştirilmesi ve Yetişkin Sahne Aracı Metabolik Akı Caenorhabditis elegans

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:44

Sitrat Sentaz Aktivite Testi: Drosophila Doku Homojenatında Mitokondriyal Sitrat Sentaz Aktivitesini Ölçmek İçin Kolorimetrik Bir Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:08

Test Numunelerinde Laktat Miktarının Belirlenmesi için Kolorimetrik Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:39

Yüksek verim Mikroplate Solunum Ölçümler Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen kondriyayı İzole kullanma

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:12

Yüksek Verimli Mikroplate Solunum Ölçümler için Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen Mitokondri İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:55

Doku çok az miktarda kullanarak Drosophila Permeabilized liflerinin mitokondrial oksijen harcama ölçme noktalar

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:35

Küçük ölçekli Renkölçer deneyleri, intrasellüler laktat ve Pyruvate nematodunun Caenorhabditis elegans içinde

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026