Virüs Sağkalımını Değerlendirmek için Hücresel Empedans Tabanlı Sağkalım Kinetik Testi

Virüsler konak hücre reseptörüne bağlanır ve bir endozoma içselleştirilir. Endozomal zar, viral zar ile birleşerek hücre içinde viral içeriği serbest bırakır.

Çekirdeğe ulaştıktan sonra, viral genom mRNA'ya kopyalanır ve daha sonra viral proteinler oluşturmak üzere çevrilir. Viral bileşenler sitoplazmaya girer ve hücreden dışarı çıkan ve sitopatik etkilere neden olan viryonlar halinde toplanır - konakçı hücrenin morfolojisindeki değişiklikler ve ölüm.

Konak hücre empedansını ölçerek virüs sağkalım kinetiğini değerlendirmek için, alt kısmında empedans ölçen mikroelektrotlarla kaplanmış çok kuyulu bir plaka alın. Kuyucuklara bir konak hücre süspansiyonu ekleyin ve hücrelerin elektrot yüzeyine yapışmasını ve büyümesini sağlamak için inkübe edin.

Daha sonra, farklı viral yüklere sahip salin önceden işlenmiş viral süspansiyonları alın. Tuzlu su tedavisi, virüsü öldüren hipokloröz asit üreten klorür ile besler ve viral enfektiviteyi azaltır. Bu viral süspansiyonları kendi kuyucuklarına ekleyin.

Yapışık hücreler tarafından hücresel empedansı - elektrotlardan geçen elektrik akımı akışına karşı koyma olgusunu - ölçün.

Virüsler yapışık konakçı hücreleri enfekte eder ve morfolojilerini değiştirerek morfize olmuş hücrelerin elektrotlardan ayrılmasına neden olur. Zamanla, daha fazla hücre enfekte oldukça, konak hücre aracılı hücresel empedans azalır.

Enfekte hücre dekolmanı nedeniyle empedanstaki değişiklik olan hücre indeksini zaman içinde çizin.

İnfluenza A virüsünün sağkalım kinetiğini değerlendirmek için, damıtılmış suda litre başına 35 gramlık bir nihai konsantrasyona sodyum klorür ekleyin ve elde edilen tuzlu su çözeltisinden 900 mikrolitre 2 mililitrelik kriyotüplere ekleyin. Her bir kriyotüpe 100 mikrolitre viral stok ekleyin ve tüpleri uygun deneysel süre boyunca 35 derece Santigrat derece inkübatöre yerleştirin.

Kuluçka süresinin bitiminden bir gün önce, 16 oyuklu bir mikrotitre plakasında, oyuk başına 100 mikrolitre virüs çoğaltma ortamında 3 x 10⁴ taze bölünmüş MDCK hücresi tohumlayın ve arka plan empedansının ölçülmesine ve hücrelerin kuyucukların dibine düzgün dağılımına izin veren adımları tekrarlayın. Ardından, hücreleri 24 saat boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte büyütün.

Ertesi gün, hücreleri iki kez yıkayın, daha sonra, gösterildiği gibi taze kültür ortamında 10 kez seyreltilmiş 100 mikrolitre tuzlu damıtılmış virüs ile hücreleri enfekte edin ve hücre empedansını en az 100 saat boyunca her 15 dakikada bir izleyin.