JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:35 dk. • July 8th, 2025
Hücreler metabolik süreçler sırasında düşük seviyelerde serbest radikal üretir.
Patolojik durumlarda, serbest radikal aşırı üretimi meydana gelir ve oksidatif strese neden olur. Bu serbest radikaller, lipid peroksidasyonu adı verilen bir süreçte hücresel zar fosfolipidlerindeki çoklu doymamış yağ asitlerine saldırır. Bu, zar hasarına ve hücre ölümüne neden olan lipid hidroperoksitler ve malondialdehit (MDA) dahil olmak üzere toksik oksidasyon ürünleri oluşturur.
İnsan serumundaki oksidatif stresi tespit etmek için in vitro tiyobarbitürik asit reaktif madde (TBARS) testi kullanılarak, oksidasyona neden olan bir bileşik ile muamele edilmiş insan serumu içeren bir tüp ile başlayın. Tedavi edilen serum, fosfolipidler, lipitler ve proteinler ile birlikte büyük ölçüde lipid peroksidasyon ürünlerini (MDA ve lipid hidroperoksitler) içerir.
Daha sonra, sodyum dodesil sülfat (SDS) ekleyin ve lipitleri çözündürmek ve MDA'yı serbest bırakmak için karıştırın. SDS, kirletici proteinleri denatüre eder. Uygun bir asidik tampon ve ardından asidik tiyobarbitürik asit (TBA) ekleyin. Yüksek sıcaklıkta inkübe edin.
Asidik koşullar ve yüksek sıcaklıklar altında, TBA molekülleri MDA ile reaksiyona girer
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin