$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Memeli gözünde, sklera ve retina arasında yer alan koroid, perivasküler makrofajlar ve retinaya oksijen ve besin sağlayan perisitlerle kaplı bir kan kılcal damarları tabakası olan koryokapillaris içerir. Koryokapilis'ten filizlenen anormal kan damarı, çeşitli vasküler göz hastalıklarında ortaya çıkar.
Düzensiz choriocapillaris filizlenme ex vivo incelemek için, sklera ve retina pigment epiteline veya RPE'ye bağlı koroid içeren hasat edilmiş fare gözü eksplantlarını alın.
Çok kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına bazal membran özütü damlacıkları veya hücre dışı matris proteinleri açısından zenginleştirilmiş bir hidrojel olan BME ekleyin. Doku düzleşmesini önleyerek eksplantları damlacıklara yerleştirin. BME'nin katılaşmasına izin verin.
Endotel hücresi veya EC'ye özgü büyüme faktörleri ile desteklenmiş ortam ekleyin. Kuluçkaya yatmak. RPE, EC'ye özgü büyüme faktörlerinin yanı sıra kapiller EC proliferasyonunu uyaran vasküler endotelyal büyüme faktörü salgılar.
Katılaşmış BME, çoğalan EC'leri filizlenen kılcal benzeri tübüller oluşturmaya teşvik eden hücre dışı bir matris oluşturur. Perisitler göç eder ve bu filizlenen kılcal damarlara yapışır, bu da kılcal EC'lerin olgunlaşmasını kolaylaştırır.
Filizlenme bölgesindeki aktive makrofajlar, filizlerin RPE'ye göç etmesini sağlayan en içteki koroid tabakası olan Bruch zarını sindirmek için enzimler salgılar.
Mikroskop altında filizlenen kılcal damarları görselleştirin. Uygun bir yazılım kullanarak, koroid filizinin kapladığı alanı ölçün.
Daha büyük bir koroidal filizlenme alanı, eksplantta ilerleyici koryokapillaris filizlendiğini gösterir.
24 oyuklu bir doku kültürü plakasının her bir oyuğunun ortasına 30 mikrolitre çözülmüş BME ekleyin. BME damlacığının, kenarlara dokunmadan plakanın altında dışbükey bir kubbe oluşturduğundan emin olun.
Dokuyu BME'nin ortasına yerleştirin. Koroid ekstansını düzleştirmeyin. Dokunun BME içinde genişlemesine izin verin. Jelenin katılaşmasına izin vermek için plakayı 37 santigrat derecede 10 dakika inkübe edin. Ardından, her bir kuyucuğa 500 mikrolitre tam klasik ortam ekleyin. Klasik ortamı her gün değiştirin.
Koroid filizlenmesi mikroskopla üç gün sonra gözlenebilir. Görüntü J ile koroid filizlenme görüntüsünü açın ve "Görüntü | Türü | ve gri tonlamalı 8 bit". Ardından, "Görüntü | Ayarla | Parlaklık/Kontrast" ve ayarlayın.
Filizlerin merkezinde bulunan koroid dokusunun ana hatlarını çizmek ve çıkarmak için "Sihirli Değnek" işlevini kullanın. Ücretsiz seçim araçlarıyla görüntünün arka planını kaldırın.
Ardından, "Görüntü | Ayarla | Eşik " ve mikrovasküler filizleri arka plana ve çevreye karşı tanımlamak için "Eşik" işlevini kullanın. "F2" ye tıklayın ve bir özet görünecektir. Seçilen alanın bir görüntüsünü ileride başvurmak üzere orijinal görüntüyle aynı klasöre kaydetmek için "Kaydet"e tıklayın.
Bir grup numune ölçüldükten sonra, kaydedilen verileri analiz için kopyalayın.