JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:52 dk. • July 8th, 2025
Östrojenler, endokrin sinyal molekülleri olarak işlev gören ve nükleer reseptörlere bağlanan steroid hormonlarıdır - östrojen reseptörleri beta, östrojen-beta reseptör kompleksleri oluşturur.
Bu ligand-reseptör kompleksleri hücre sitoplazmasında dimerize olur ve homodimerler oluşturur. Elde edilen homodimer çekirdeğe girer, östrojen yanıt elemanına, ERE'ye (hedef genin promotörü içindeki spesifik bir DNA dizisi) bağlanır ve transkripsiyonu başlatır.
Fitoöstrojenlerin östrojenik aktivitesini belirlemek için - östrojen fonksiyonunu taklit eden bitki kaynaklı ikincil metabolitler - uygun bir ortamda süspanse edilmiş raportör hücreleri içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Raportör hücreler, östrojen reseptörleri beta'yı aşırı eksprese etmek için tasarlanmıştır ve ERE promotörüne kaynaşmış bir lusiferaz geni ile transfekte edilir. Fitoöstrojen içeren örnek çözeltiyi ekleyin ve inkübe edin.
İnkübasyon sırasında, fitoöstrojen, raportör hücrelerde eksprese edilen östrojen reseptörlerine, beta'ya bağlanır. Bağlandıktan sonra, fitoöstrojen reseptör kompleksleri dimerize olur ve çekirdeğe yer değiştirir.
Çekirdeğin içinde, dimerize kompleks ERE'ye bağlanır. Bağlanma, lusiferaz gen transk
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin