JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:52 dk. • July 8th, 2025
Gelişmekte olan nöronlar, nöronlar arası iletişim için gerekli olan dendritleri ve aksonları geliştirmek için nörit büyümesi yoluyla hücre gövdelerinden sitoplazmik süreçleri genişletir.
Bir hedef proteinin nörit büyümesi üzerindeki etkisini incelemek için, tabanında poli-D-lizin kaplı bir lamel bulunan çok kuyulu bir plaka alın. Lamelin yüzeyi, embriyonik sıçan beyninden türetilen yapışık bir birincil kortikal nöron kültürüne sahiptir.
Nöronları iki tip plazmit içeren bir karışımla tedavi edin - gelişmiş yeşil floresan proteini kodlayan bir EGFP plazmidi ve hedef proteini uygun bir transfeksiyon reaktifinde kodlayan ikinci bir plazmit.
Transfeksiyon reaktifi, plazmitlerin hücrelere girişini kolaylaştırır.
Transfeksiyon sonrası, her iki plazmit de eksprese edilir, yeşil floresan proteinleri ve hedef proteinleri üretir. EGFP'nin ekspresyonu, ko-transfekte edilmiş hücrelere yeşil floresan verir.
Nörit büyümesini uyarma potansiyeline sahip hedef proteinler, hücre iskeletinin yeniden düzenlenmesini teşvik eden ve nöronal projeksiyonların ve uzantılarının gelişmesine yol açan hücresel sinyallemeyi başlatır.
Harcanan ortamı aspire edin ve hücreleri paraformaldehit ile sabitleyin. Hücrele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin