JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:09 dk. • July 8th, 2025
Yüksek çözünürlüklü erime polimeraz zincir reaksiyonu, HRM-PCR, çift sarmallı DNA, dsDNA dizi varyasyonlarını yüksek hassasiyetle tespit eder.
Aktif olmayan Taq polimeraz, deoksiribonükleotid trifosfatlar - dNTP'ler - ve floresan raportör boyası içeren bir ana karışımla başlayın. İleri ve geri astarları ekleyin. Karışımı bir PCR plakasının kuyularına pipetleyin.
dsDNA şablonunu ekleyin. Karışımın buharlaşmasını önleyerek plakayı kapatın. PCR'ye başlayın.
Yüksek denatüre etme sıcaklığı, dsDNA'yı tek sarmallı DNA'ya, ssDNA'ya denatüre eder ve polimerazı aktive eder. Reaksiyon daha sonra tavlama sıcaklığına soğutulur ve bölgeye özgü tamamlayıcı baz eşleştirmesi yoluyla ssDNA'lara ileri ve geri primer bağlanmasını kolaylaştırır.
Aktive edilmiş polimeraz işe alınır ve DNA-primer dupleksini dNTP ilavesi ile genişletir.
Doymuş konsantrasyonlarda bulunan dsDNA'ya özgü bir boya olan floresan raportör boyası, tüm dubleks içinde iç içe geçerek parlak bir şekilde floresan verir. Dubleks, birden fazla PCR döngüsüne tabi tutulur ve birkaç varyant içeren fragman üretir.
PCR sonrası, reaksiyon sıcaklığını zaman içinde sabit bir şekilde yeniden yükselterek erime eğrisi analizi yapın.
Nükleotid dizi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin