PCR Teknikleri

Bu video, bir DNA örneğindeki indel mutasyonunu tanımlamada dijital damlacık polimeraz zincir reaksiyonunun rolünü göstermektedir. ddPCR'nin yüksek hassasiyeti ve hassasiyeti, düşük seviyelerde bile bir numunede bulunan nadir mutasyonların doğru ve tutarlı bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Genomun farklı bölgelerindeki indel mutasyonlarını tanımlayabilir ve ölçebilir, mutasyon mekanizmaları ve bu mutasyonların işlevsel sonuçları hakkında değerli bilgiler sağlar.

Bu video, kuyucuklar boyunca gradyan tavlama sıcaklığını ayarlayan primerlerin tavlama sıcaklığının optimizasyonu için gradyan polimeraz zincir reaksiyonunu göstermektedir. Farklı tavlama sıcaklıklarının etkisi, reaksiyon durumunu optimize etmeye yardımcı olan güçlendirilmiş ürünlerin verimi ile belirlenir.

Bu videoda, iki farklı genetik belirteci aynı anda tespit etmede yararlı olan geleneksel PCR tekniğinin bir modifikasyonu olan çift yönlü dijital PCR (ddPCR) tekniğini gösteriyoruz. Tek bir PCR reaksiyonu, bağımsız olarak amplifiye edilen nanolitre boyutunda emülsifiye edilmiş damlacıklara bölünür ve hedef dizilerin başlangıç konsantrasyonunu hesaplamak için damlacıkların fraksiyonundan farklı renkli floresan amplifikasyon sinyallerinin tespiti kullanılır.

Bu video, gerçek zamanlı ters transkripsiyon PCR kullanarak viral enfeksiyonu tespit etmek için nicel bir yöntemi göstermektedir. Ters transkripsiyon adımı, RNA'yı cDNA'ya dönüştürür ve bu daha sonra PCR döngüleri yoluyla amplifiye edilir. Numunede viral RNA'nın varlığı, PCR'den elde edilen DNA'nın amplifikasyon ve ayrışma eğrileri analiz edilerek doğrulanır.

Bu videoda, somatik mutasyonları tespit eden vahşi tip bloke edici polimeraz zincir reaksiyonu veya WTB-PCR açıklanmaktadır. PCR bazlı teknik, kilitli bir nükleik asit veya LNA, tamamlayıcı vahşi tip aleline bağlanan ve uzamasını bloke eden bir oligonükleotid kullanır. Blokaj, seçici olarak, düşük seviyeli mutant alellerin, numunedeki vahşi tip varyantları üzerinde amplifikasyonuna izin verir.

Bu videoda, DNA kantitatifikasyonu yoluyla T7 bakteriyofajlarını numaralandırmak için kantitatif polimeraz zincir reaksiyonunu (qPCR) tartışıyoruz. PCR karışımındaki floresan boya, yeni sentezlenen DNA zincirlerine bağlanır ve ölçülen floresan yayar.

Bu video, tek tüplü bir reaksiyonda oligonükleotid kaplı polimer mikroküreler kullanılarak tek sarmallı DNA'nın amplifiye edilmesi tekniğini açıklar. Bu işlem, DNA dizilimi ve mikrodizi analizi için daha fazla kullanılabilen saf tek sarmallı DNA verir.

Bu videoda, iki primer seti kullanılarak iki ardışık PCR amplifikasyon işleminden oluşan bir teknik olan iç içe polimeraz zincir reaksiyonu açıklanmaktadır. İlk primer setinin, ikinci setin yukarısındaki dizilere tavlanması amaçlanmıştır, bu da spesifik gen dizilerinin seçici amplifikasyonu ile sonuçlanır. Bu PCR, normal bir PCR'den daha hassas ve spesifiktir ve çeşitli hastalıklar için bir tespit tekniği olarak yaygın olarak kullanılmaktadır.

Bu videoda, erime sıcaklığı analizine dayalı olarak farklı dizi uzunluklarına sahip DNA fragmanlarının uzunluk polimorfizmini belirlemek için yüksek çözünürlüklü bir erime PCR tekniğini açıklıyoruz.

Bu video, klinik tanı ve prognoz için erken bir biyobelirteç olarak farklı beyaz kan hücresi popülasyonlarında metillenmiş DNA bölgelerinin eş zamanlı olarak ölçülmesi için multipleks damlacık polimeraz zincir reaksiyonu tekniğini göstermektedir.

Bu video, DNA örneklerindeki tek nükleotid varyasyonlarının tespiti için tüp içinde çip formatında dijital PCR'nin faydasını göstermektedir. Tek bir PCR reaksiyonu, bağımsız PCR reaksiyonları olarak işlev gören odalara bölünür ve odalardaki güçlendirilmiş hedeflerden gelen floresan sinyallerinin tespiti, numunedeki varyant alelin frekansını hesaplamak için kullanılır.

Bu video, nadir transkript varyantlarını tespit etmede yararlı olan dijital PCR tekniğinin bir varyasyonu olan çip tabanlı dijital PCR'yi göstermektedir. PCR reaksiyonu, her biri bağımsız bir reaksiyon olarak işlev gören bir nanoakışkan çipin odalarına bölünür. Güçlendirilmiş hedeflere sahip odalardan gelen floresan sinyallerinin tespiti, numunede nadir transkript varyantlarının varlığını doğrular.