Antijen-antikor etkileşimlerini tek molekül düzeyinde incelemek için kütle fotometrisi

Kütle fotometrisi kullanarak antijen-antikor etkileşimlerini tespit etmek için, önce istenen saflaştırılmış antijen ve antikor konsantrasyonunu gerekli süre boyunca inkübe ederek antijen-antikor bağlanmasını kolaylaştırın. Antijen bağlanmasının stokiyometrisine dayanarak, bu antikorların paratop bölgeleri değişen sayıda bağlı antijene sahip olabilir.

Antijen-antikor kompleksleri ile birlikte serbest antikorları içeren çözeltiyi önceden monte edilmiş bir akış odasından geçirin. Odayı bir kütle fotometresinin mikroskop aşamasına sabitleyin. Ardından, optimum görüntüleme için lazer ışınını akış odasından geçirin.

Her bir antikora bağlı antijenlerin sayısına bağlı olarak, komplekslerin moleküler kütlesi değişir. Kütledeki bu değişimler, komplekslerin ışığı farklı şekilde dağıtmasına neden olur.

İki antijenin tek bir antikorun her iki paratopuna da bağlandığı daha yüksek moleküler kütleli kompleksler, tek antijen içeren komplekslere kıyasla daha fazla ışık saçar. Ek olarak, serbest antikorlar en az miktarda ışık saçılımı gösterir.

Bir dedektör saçılan ışığı toplar ve frekansını ve yoğunluğunu ölçer. Fotometre, saçılan ışıktaki dalgalanmaları bir girişim modeli olarak kaydeder ve bunu no