Hücre Temaslarında Protein Etkileşimini İncelemek için Floresan Dalgalanma Spektroskopisi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:42 dk. • July 8th, 2025
Komşu hücre yüzeylerindeki proteinlerin aracılık ettiği hücre-hücre etkileşimleri, bir floresan dalgalanma spektroskopisi testi kullanılarak canlı hücrelerde incelenebilir.
İlk olarak, bir transmembran proteini olan bir adezyon reseptörünü ifade eden ayrı hücre kültürleri alın. İki popülasyondan hücrelerdeki reseptör, spektral olarak ayrılmış floresan proteinleri ile etiketlenmiştir. Bu floresan etiketler, reseptörün sitoplazmik bölgesinde bulunur ve hücre-hücre etkileşimine müdahaleyi önler.
Ortamı atın ve hücre ayrılmasını kolaylaştıran tripsin ekleyin. İki hücre popülasyonunu karıştırın ve inkübe edin, komşu hücrelerin reseptörlerinin homotipik trans-etkileşimler oluşturmasına izin verin.
Hücreleri konfokal bir mikroskop altına yerleştirin. Numuneyi uygun dalga boylarına sahip lazer kaynakları kullanarak aydınlatın ve her iki floresan etiketinden de emisyona neden olun. Temas halinde olan farklı renkli floresan sinyallerine sahip iki komşu hücreyi bulun.
Her iki floresan etiketin spektral kanalını kullanarak, temas halindeki hücre zarlarının bölgesine dik bir çizgi taraması elde edin. Lazer, numunenin küçük bir hacmine odaklanır - algılama hacmi. Floresan etiketli reseptörler al
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin