Protein-Protein Etkileşimleri için β-Laktamaz Tabanlı Kondüktimetrik Biyosensör Testi

β laktamaz bazlı iletken biyosensör testine başlamak için çalışan, sayaç ve referans elektrotları olan bir dönüştürücü çip alın. Çalışma elektrodu, hedef antijen immobilizasyonunu kolaylaştıran iletken bir polimer kaplamaya sahiptir. Referans ve karşı elektrotlar bu polimer kaplamadan yoksundur.

Çip üzerine hedef antijeni içeren bir çözelti ekleyin. Kuluçkaya yatmak. Antijen, kovalent olmayan etkileşimler yoluyla çalışma elektrot yüzeyi üzerinde hareketsiz hale gelir. Bağlanmamış antijenleri çıkarmak için yıkayın.

Bir engelleme çözümü ekleyin. Çözeltideki proteinler, çalışma elektrodu üzerindeki bağlanmamış bölgelere bağlanır ve bunları bloke eder.

İmmobilize antijeni tespit etmek için çipe iki işlevli bir kimerik protein ekleyin. Kimerik protein, antibiyotik direncinden sorumlu bir bakteri proteini olan β-laktamaz enzimi içerir. Enzim, tek alanlı antikorların N-terminal değişken bölgesi olan bir nano gövdeye kaynaştırılır.

İnkübasyon üzerine, proteinin nano gövdesi hareketsizleştirilmiş hedef antijene bağlanır. Bağlanmamış kimerik proteinleri çıkarmak için yıkayın.

Çipi bilgisayar kontrollü bir dijital multimetreye takın. β-laktamaz için bir substrat olan antibiyotik benzilpenisilin içeren bir tespit çözeltisi ekleyin.

Benzilpenisilin, antijene bağlı kimerik proteinin β-laktamazına bağlanır ve hidrolize olur - protonların salınmasına neden olur. Protonlar, polimerin elektriksel iletkenliğinde bir değişikliğe neden olur.

Referans elektrot ile çalışma elektrodu arasındaki gerçek zamanlı iletkenlik farkını, hareketsizleştirilmiş hedef antijen ile çizin ve kimerik protein ile etkileşimini doğrulayın.

β laktamaz bazlı iletken biyosensör testine başlamak için çalışan, sayaç ve referans elektrotları olan bir dönüştürücü çip alın. Çalışma elektrodu, hedef antijen immobilizasyonunu kolaylaştıran iletken bir polimer kaplamaya sahiptir. Referans ve karşı elektrotlar bu polimer kaplamadan yoksundur.

Çip üzerine hedef antijeni içeren bir çözelti ekleyin. Kuluçkaya yatmak. Antijen, kovalent olmayan etkileşimler yoluyla çalışma elektrot yüzeyi üzerinde hareketsiz hale gelir. Bağlanmamış antijenleri çıkarmak için yıkayın.

Bir engelleme çözümü ekleyin. Çözeltideki proteinler, çalışma elektrodu üzerindeki bağlanmamış bölgelere bağlanır ve bunları bloke eder.

İmmobilize antijeni tespit etmek için çipe iki işlevli bir kimerik protein ekleyin. Kimerik protein, antibiyotik direncinden sorumlu bir bakteri proteini olan β-laktamaz enzimi içerir. Enzim, tek alanlı antikorların N-terminal değişken bölgesi olan bir nano gövdeye kaynaştırılır.

İnkübasyon üzerine, proteinin nano gövdesi hareketsizleştirilmiş hedef antijene bağlanır. Bağlanmamış kimerik proteinleri çıkarmak için yıkayın.

Çipi bilgisayar kontrollü bir dijital multimetreye takın. β-laktamaz için bir substrat olan antibiyotik benzilpenisilin içeren bir tespit çözeltisi ekleyin.

Benzilpenisilin, antijene bağlı kimerik proteinin β-laktamazına bağlanır ve hidrolize olur - protonların salınmasına neden olur. Protonlar, polimerin elektriksel iletkenliğinde bir değişikliğe neden olur.

Referans elektrot ile çalışma elektrodu arasındaki gerçek zamanlı iletkenlik farkını, hareketsizleştirilmiş hedef antijen ile çizin ve kimerik protein ile etkileşimini doğrulayın.