Protein-Protein Etkileşimleri için β-Laktamaz Tabanlı Kondüktimetrik Biyosensör Testi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biyolojik Teknikler

0 görüntüleme • 4:43 dk • July 8th, 2025

β laktamaz bazlı iletken biyosensör testine başlamak için çalışan, sayaç ve referans elektrotları olan bir dönüştürücü çip alın. Çalışma elektrodu, hedef antijen immobilizasyonunu kolaylaştıran iletken bir polimer kaplamaya sahiptir. Referans ve karşı elektrotlar bu polimer kaplamadan yoksundur.

Çip üzerine hedef antijeni içeren bir çözelti ekleyin. Kuluçkaya yatmak. Antijen, kovalent olmayan etkileşimler yoluyla çalışma elektrot yüzeyi üzerinde hareketsiz hale gelir. Bağlanmamış antijenleri çıkarmak için yıkayın.

Bir engelleme çözümü ekleyin. Çözeltideki proteinler, çalışma elektrodu üzerindeki bağlanmamış bölgelere bağlanır ve bunları bloke eder.

İmmobilize antijeni tespit etmek için çipe iki işlevli bir kimerik protein ekleyin. Kimerik protein, antibiyotik direncinden sorumlu bir bakteri proteini olan β-laktamaz enzimi içerir. Enzim, tek alanlı antikorların N-terminal değişken bölgesi olan bir nano gövdeye kaynaştırılır.

İnkübasyon üzerine, proteinin nano gövdesi hareketsizleştirilmiş hedef antijene bağlanır. Bağlanmamış kimerik proteinleri çıkarmak için yıkayın.

Çipi bilgisayar kontrollü bir dijital multimetreye takın. β-laktamaz için bir substrat olan antibiyotik benzilpenisilin içeren bir tespit çözeltisi ekleyin.

Benzilpenisilin, antijene bağlı kimerik proteinin β-laktamazına bağlanır ve hidrolize olur - protonların salınmasına neden olur. Protonlar, polimerin elektriksel iletkenliğinde bir değişikliğe neden olur.

Referans elektrot ile çalışma elektrodu arasındaki gerçek zamanlı iletkenlik farkını, hareketsizleştirilmiş hedef antijen ile çizin ve kimerik protein ile etkileşimini doğrulayın.

β laktamaz bazlı iletken biyosensör testine başlamak için çalışan, sayaç ve referans elektrotları olan bir dönüştürücü çip alın. Çalışma elektrodu, hedef antijen immobilizasyonunu kolaylaştıran iletken bir polimer kaplamaya sahiptir. Referans ve karşı elektrotlar bu polimer kaplamadan yoksundur.

Çip üzerine hedef antijeni içeren bir çözelti ekleyin. Kuluçkaya yatmak. Antijen, kovalent olmayan etkileşimler yoluyla çalışma elektrot yüzeyi üzerinde hareketsiz hale gelir. Bağlanmamış antijenleri çıkarmak için yıkayın.

Bir engelleme çözümü ekleyin. Çözeltideki proteinler, çalışma elektrodu üzerindeki bağlanmamış bölgelere bağlanır ve bunları bloke eder.

İmmobilize antijeni tespit etmek için çipe iki işlevli bir kimerik protein ekleyin. Kimerik protein, antibiyotik direncinden sorumlu bir bakteri proteini olan β-laktamaz enzimi içerir. Enzim, tek alanlı antikorların N-terminal değişken bölgesi olan bir nano gövdeye kaynaştırılır.

İnkübasyon üzerine, proteinin nano gövdesi hareketsizleştirilmiş hedef antijene bağlanır. Bağlanmamış kimerik proteinleri çıkarmak için yıkayın.

Çipi bilgisayar kontrollü bir dijital multimetreye takın. β-laktamaz için bir substrat olan antibiyotik benzilpenisilin içeren bir tespit çözeltisi ekleyin.

Benzilpenisilin, antijene bağlı kimerik proteinin β-laktamazına bağlanır ve hidrolize olur - protonların salınmasına neden olur. Protonlar, polimerin elektriksel iletkenliğinde bir değişikliğe neden olur.

Referans elektrot ile çalışma elektrodu arasındaki gerçek zamanlı iletkenlik farkını, hareketsizleştirilmiş hedef antijen ile çizin ve kimerik protein ile etkileşimini doğrulayın.

15:27

Dört Biyosensör Platformları kullanma Yüksek yakınlık Antikor-antijen Cilt Kinetiklerinin Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:18

Transkripsiyon protein-protein etkileşimlerini Incelemek için Biolayer Interferometri (BLı) uygulaması

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:39

Moleküler Chaperone Hsp90 ve İstemci Protein Kinaz Cdc37 Arasındaki Biyomoleküler Etkileşimi Alan Etkili Biyosensing Teknolojisini Kullanarak Keşfetmek

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:32

Amplifiye Lüminesan Yakınlık Homojen Deneyi: Protein-Protein Etkileşimlerini İnhibe Eden Küçük Molekülleri Taramak için Boncuk Tabanlı Bir Yakınlık Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:43

Protein-Protein Etkileşimlerini Tespit Etmek için Grafen Biyosensör Tabanlı Alan Etkili Biyoalgılama

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:49

Yerinde Protein-Protein Etkileşimlerini İncelemek için Yakınlık Ligasyon Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:15

Protein-protein etkileşimlerini tespit etmek için biyotinile hücreye nüfuz eden peptit probu

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:57

Protein-protein etkileşimleri ve Allosterik Ligand Etkileri Kinetiği Ölçüm Bio-katman Interferometri

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:06

Biyomoleküler etkileşimleri algılamak için bir Conductimetric Biyoalgılayıcı β-lactamase tabanlı tahlil kullanımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:41

Bir iyon kanal protein biyo-katman Interferometry tahlil tarafından küçük molekülleri ile etkileşimi Kinetik yakalama

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026