JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:05 dk. • July 8th, 2025
Nükleer manyetik rezonans veya NMR spektroskopisi, atomik düzeyde protein-protein etkileşiminin tespit edilmesini sağlar.
Küresel ve sarmal proteinler arasındaki etkileşimleri incelemek için, saflaştırılmış vahşi tip veya mutant küresel proteinleri bir nitrojen izotopu olan 15N ile etiketleyin. Bir NMR tüpünde, etiketli küresel ve etiketsiz sarmal proteinleri bir NMR standardı içeren bir çözücü içinde karıştırın. Tüpü NMR spektrometresine yerleştirin.
Spektrometre mıknatısları, 15N etiketli küresel protein çekirdeğini alana paralel olarak hizalayan güçlü bir manyetik alan oluşturur. Bir radyo frekansı veya RF darbesi, alana antiparalel hizalamak için 15N-çekirdeğini uyarır.
15N çekirdeğin iki durum arasındaki geçişi için gereken darbe frekansı, rezonans frekansını tanımlar. 15N-rezonans frekansının NMR standardına normalleştirilmesi, 15N-kimyasal kaymayı ölçer.
Manyetik alan, 15N'ye bağlı 1 H-çekirdeğini alana paralel olarak hizalamak için ayarlanır. RF darbeleri ayarlanır ve 1H-kimyasal kayma kaydedilir.
Protein etkileşimleri sırasında, etkileşen amino asit kalıntılarını çevreleyen kimyasal ortam değişir, 15 N-1H kimyasal bağlarını ve karşılık gelen kimyasal kaymaları değiştirir.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin