JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 5:22 dk. • July 8th, 2025
Hedef protein ile kaplanmış çok kuyucuklu bir plakanın kuyucuklarına bir faj kütüphanesi ekleyerek faj gösterimine başlayın. Faj kütüphanesi, genetik olarak tasarlanmış fajlar içerir ve her biri yüzeyinde bir kaplama proteinine kaynaşmış ayrı bir protein varyantı gösterir. İnkübe edin, faj ve hedef proteinlerin etkileşime girmesine izin verin.
Hedef protein afinitesi yüksek proteinlere sahip fajlar, hedef proteine bağlanır. Bağlanmamış fajları çıkararak bir tamponla yıkayın. Asidik bir çözelti ekleyin, faj ve hedef protein etkileşimlerini bozun, fajları çözeltiye salın. Faj stabilitesini koruyarak çözelti pH'ını bir tampon kullanarak nötralize edin.
Fajları yeni bir tüpe aktarın. Spesifik olmayan etkileşimleri önleyerek protein içeren bir bloke edici çözelti ile inkübe edin.
Fajları aktif olarak bölünen bir E. coli süspansiyonuna aktarın, bakterileri enfekte edin ve faj replikasyon döngüsünü başlatın. Bakterileri enfekte eden yardımcı fajlarla takviye edin ve döl fajlarını paketlemek için gerekli kaplama proteinlerini sağlayın. Süspansiyonu, fajla enfekte olmuş bakteri üremesine izin veren seçici bir ortama aktarın.
Döl fajları sonunda ortama salınır. Merkezkaç. Süpernatan içeren f
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin