Transkripsiyon Faktörü-DNA Komplekslerinin Tespiti için Elektroforetik Hareketlilik Kaydırma Testi

Transkripsiyon faktörleri gibi düzenleyici proteinler, gen ekspresyonunu düzenleyerek promotör bölgelerdeki spesifik DNA dizilerini tanır ve bunlara bağlanır.

Elektroforetik hareketlilik kayma testini kullanarak spesifik transkripsiyon faktörü-DNA etkileşimlerini tespit etmek için, istenen bir transkripsiyon faktörü ve bir bağlayıcı tamponda spesifik kısa, kızılötesi, floresan boya etiketli DNA probları içeren bir tüp ile başlayın. Karanlıkta inkübe edin, boya foto ağartmayı önleyin.

Tamponun iyonik kuvveti ve pH'ı, transkripsiyon faktörünün DNA probu üzerindeki spesifik bağlanma dizilerini tanımlaması ve bağlaması için uygun koşulları sağlar. Tampondaki magnezyum iyonları, protein-DNA komplekslerini daha da stabilize eder.

Karışıma uygun bir yükleme boyası ekleyerek elektroforez ilerlemesini görselleştirmeye yardımcı olun. Bu karışımı ve DNA problarını prekast, denatüre olmayan bir poliakrilamid jelin kuyucuklarına yükleyin.

Karanlıkta elektroforez yapın.

Uygulanan elektrik alanı, düşük moleküler ağırlıklı, bağlanmamış, negatif yüklü DNA problarının jel boyunca pozitif yüklü anotlara doğru hareket etmesine neden olur. Bununla birlikte, daha yüksek moleküler ağırlığa sahip büyük pr