JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 7:05 dk. • July 8th, 2025
Bir hedef proteinin DNA üzerindeki bağlanma yerlerini belirlemek için, kromatindeki spesifik DNA dizilerine çapraz bağlı bir hedef protein içeren oligodendrosit öncü hücreleri ile başlayın.
Hücreleri proteaz inhibitörleri içeren bir lizis tamponu ile tedavi edin. Lizis tamponu hücreleri parçalarken, inhibitörler protein-kromatin komplekslerinin bütünlüğünü korumak için proteazları inaktive eder.
Kompleksleri daha küçük kromatin parçalarına kesmek için içeriği sonikleştirin, bazıları hedef proteini koruyarak.
Hücre bileşenlerini peletlemek için santrifüjleyin ve süpernatan içeren kromatin parçalarını yeni bir tüpe aktarın. Kromatin fragmanları üzerindeki hedef proteine spesifik olarak bağlanan anti-hedef antikorlarla inkübe edin.
Tüpü, önceden bağlanmış antikorların Fc bölgesine bağlanan protein A kaplı manyetik boncuklarla destekleyin. Kromatin fragmanları ile komplekslenmiş antikora bağlı hedef proteinleri seçici olarak çökeltmek için bir manyetik alan uygulayın.
Protein-kromatin etkileşimlerini bozmak ve ilişkili proteinler olmadan çıplak DNA'yı serbest bırakmak için boncuk komplekslerini yüksek tuz içeren bir elüsyon tamponu ile muamele edin.
DNA'yı çıkarmak için organik çözücül
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin