JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:25 dk. • July 8th, 2025
RNA bağlayıcı proteinler, RBP'ler, mRNA'nın translasyon başlatma bölgesine, TIR'a bağlanarak ve translasyonu baskılayarak transkripsiyon sonrası düzenleyiciler olarak işlev görür.
Bir raportör genin translasyonel baskılanması yoluyla RNA-RBP etkileşimlerini incelemek için, iki plazmit içeren bir bakteri hücre kültürü alın - bağlanma bölgesi ve RBP plazmitleri.
Bağlanma bölgesi plazmidi, bir floresan raportör genini kodlar. Transkripsiyon üzerine, ortaya çıkan mRNA'nın TIR'ı, RBP'ler tarafından tanınan bir diziye sahip bir ribozom bağlama bölgesi ve bir saç tokası yapısı içerir.
Ribozomlar, mRNA üzerindeki bağlanma bölgesine bağlanır ve firkete yapısını kararsızlaştırarak mRNA translasyonuna ve floresan raportör protein oluşumuna yol açar. RBP plazmiti, farklı bir floresan proteinine kaynaşmış kimerik bir RBP'yi ifade eder. İndüklenebilir bir promotör, kimerik protein ekspresyonunu kontrol eder.
Promotöre bağlanan ve kimerik protein ekspresyonunu indükleyen bir transkripsiyon faktörünü aktive eden indükleyiciyi ekleyin. Kimerik proteinin RBP'si saç tokası yapısına bağlanır. Bu, ribozomun mRNA'ya bağlanmasını bloke ederek raportör protein translasyonunu inhibe eder.
Artan indükleyici
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin