JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 5:42 dk. • July 8th, 2025
Radyasyona bağlı DNA çift iplikli kırılmalar veya DSB'ler, hasarlı bölgede DNA onarım proteini alımını başlatır ve DNA onarımını aktive eder.
Dolaylı immünofloresan kullanarak DSB bölgelerinde DNA onarım proteinleri γH2AX ve 53BP1'i tespit etmek için, epitel hücreleri içeren lameller alın. Hücrelerin bir alt kümesini ışınlayın. İnkübe edin, kontrol ışınlanmamış ve ışınlanmış hücrelerin belirli süreler için büyümesine izin verin.
Hücre çekirdeğini çıkarmak için bir tampon ile muamele edin. Morfolojilerini korumak için hücre çekirdeklerini sabitleyin. Spesifik olmayan primer antikor bağlanmasını en aza indirmek için bir bloke edici solüsyon ile tedavi edin.
İki DNA onarım proteinini hedef alan birincil antikorlar ekleyin. Antikorlar ilgili proteinlere bağlanır.
Sırasıyla kırmızı ve yeşil floroforlarla etiketlenmiş ikincil antikorlarla inkübe edin. İkincil antikorlar - her bir birincil antikor için spesifik - hedeflerine bağlanır. Bir cam slayt üzerine DAPI içeren montaj ortamı ekleyin. Görüntüleme için lamellerin üzerine monte edin.
DNA bağlayıcı bir boya olan DAPI, çift sarmallı DNA'nın AT açısından zengin küçük oluklarına bağlanarak çekirdekleri boyar. Bir floresan mikroskobu kulla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin