DNA perdeleri üzerinde füzyon proteini kondensatlarının montajını görselleştirmek için tek moleküllü görüntüleme

Bir kimerik onkojenik füzyon proteini, bir transkripsiyon faktörü proteininin DNA bağlama alanı, DBD ile kaynaşmış bir RNA bağlayıcı proteinin N-terminal düşük karmaşıklık alanını, LCD'yi içerir. Bu proteinler, RNA polimeraz-II'yi işe alan ve onkogenezi yönlendiren bir protein kondensatı oluşturur.

Tek moleküllü görüntüleme ile protein kondensatlarının montajını görselleştirmek için, bir DNA akış hücresi ile başlayın - giriş ve çıkış enjeksiyon portları ile donatılmış kaynaşmış bir silika cam slayt. Akış hücresinin yüzeyi, yüzeyi korumak için biyotinile edilmiş bir lipid çift tabakası ile kaplanır ve zikzak bir bariyer ile üretilir.

Mikroakışkan bir sisteme bağlayın. Lipid tabakası üzerindeki yüksek bağlayıcı afiniteye sahip ligandı biotin'e bağlanan bir streptavidin çözeltisi ekleyin. Füzyon proteini bağlama dizilerinin çoklu tekrarlarını içeren biyotin etiketli çift sarmallı lambda DNA'sı enjekte edin. Lipid çift tabakasının streptavidini, DNA'nın biyotinine bağlanır ve lambda DNA'sını çift tabakaya bağlar.

Uygun bir tamponla yıkayın. Akışının hidrodinamik kuvveti, sabitlenmiş DNA moleküllerini düzleştirir ve bariyerlerin üzerinde DNA perdeleri olarak asılı kalmalarını sağlar.

Ak