Protein-Fosfoinositid Etkileşimlerini Tespit Etmek için Desteklenen Lipid Çift Katmanları Üzerinde pH Modülasyon Testi

Fosfatidilinositol 4,5-bifosfat veya PIP2, zara bağlı küçük bir fosforile fosfolipiddir. Spesifik PIP2 bağlama alanlarına sahip fosfolipaz C veya PLC, PIP2'ye bağlanır ve birkaç hücresel süreç için gerekli olan ikincil haberciler üretir.

PLC-PIP2 etkileşimlerini in vitro olarak tespit etmek için, biri pH'a duyarlı bir floresan boyaya konjuge edilmiş PIP2 ve fosfolipid karışımını içeren küçük bir unilamellar vezikül, SUV, asidik süspansiyon ile başlayın.

Çözeltiyi önceden monte edilmiş fabrikasyon bir mikroakışkan cihazın girişine pipetleyin ve çıkış borusunu bağlayın. Cihazı bir floresan mikroskobu aşamasına aktarın ve sabitleyin. Yerçekimi yoluyla, SUV'lar hidrofilik bir cam lamelden yapılmış mikrokanal tabanından geçer.

SUV'lar cam yüzeyde adsorbe olur, çözeltinin pH'ı ikisi arasındaki elektrostatik itmeyi düşürür. SUV'lar yüzeyle etkileşime girer, deforme olur ve büyük veziküller oluşturmak için kaynaşır.

Kritik yüzey kaplamasını takiben, veziküller kendiliğinden yırtılır ve desteklenen bir lipid çift tabakası olan SLB'yi oluşturur. Adsorbe edilmemiş vezikülleri çıkararak kanaldan bir tampon geçirin.

Uygun bir floresan kanalı kullanarak, SLB'deki pH'a duyarlı boya floresansını (