JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:19 dk. • July 8th, 2025
Bir protein oligomeri, daha büyük bir fonksiyonel birim oluşturmak için birbirine bağlanan çoklu protein alt birimlerinden oluşan bir komplekstir.
Protein monomerlerinin ve bunların oligomerlerinin çözelti içindeki moleküler ağırlığını, boyut dışlama kromatografisi ve çok açılı ışık saçılımının bir kombinasyonu olan SEC-MALS ile belirlemek için, bir boyut dışlama kromatografisi veya SEC sütunu ile başlayın.
Sütun, içlerinde daha küçük boyutlu molekülleri yakalayan gözenekli elek benzeri küresel jel boncuklar içerir. Sütunu, proteinin doğal durumuyla uyumlu bir tampon ile dengeleyin.
Kolonun üst kısmına protein monomerleri ve oligomerleri içeren bir numune yükleyin.
Akış sırasında, oligomerler kolonun parçacıklar arası boşluğundan geçerken, monomerler boncukların gözenekleri içinde sıkışıp kalır. Bu, daha büyük boyutlu protein oligomerlerinin daha küçük boyutlu monomerlerden daha hızlı hareket etmesine neden olur.
Hızlı salınımlı oligomerleri ve ardından yavaş salınımlı monomerleri MALS dedektörüne yönlendirin.
Dedektörden geçerken, farklı açılarda dağılmış bir lazer ışığı onları aydınlatır. Çok alt birimli oligomerler, monomerden daha fazla ışık saçar.
Saçılan ışığın çoklu açılarda
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin