Reseptör-ligand etkileşimlerini bozan bileşikleri tanımlamak için rekabetçi bağlanma testi

Rekabetçi bağlanma testi, bir hedef reseptöre rekabetçi bir şekilde bağlanarak ve doğal ligand bağlanmasını inhibe ederek reseptör-ligand etkileşimlerini bozan küçük molekülleri tanımlar.

Bir reseptöre özgü küçük molekül antagonistinin varlığında bir reseptörün doğal ligandı ile etkileşimlerini tanımlamak için, hedef reseptörü eksprese eden insan T-lenfosit hücrelerinin bir süspansiyonu ile başlayın.

Hücre süspansiyonunu, artan antagonist konsantrasyonları içeren çok kuyulu bir plakanın kuyucuklarına ekleyin. Kuluçkaya yatmak. Antagonist, reseptörün doğal ligand bağlanma bölgesi olan ortosterik bağlanma bölgesine bağlanır.

Kuyucuklara sabit bir konsantrasyonda floresan etiketli doğal ligand ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

Düşük konsantrasyonlarda, antagonistler az sayıda ortosterik bağlanma bölgesi işgal eder ve reseptörlere doğal ligand bağlanmasına izin verir. Bununla birlikte, daha yüksek konsantrasyonlarda, antagonistler ortosterik bağlanma bölgelerinin çoğunu işgal eder ve minimal doğal ligand-reseptör bağlanmasına izin verir.

Hücreleri peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Hücresel morfolojiyi koruyarak hücreleri sabitlemek için paraformaldehit içinde yeniden süspanse