JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:35 dk. • July 8th, 2025
Reseptör-ligand etkileşimlerini incelemek için, yüzeylerinde test ligandlarını eksprese eden hedef hücrelere sahip ortam içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Tasarlanmış fare BW hücreleri ekleyin - zara bağlı kimerik reseptörleri eksprese eden yeni bir B hücresi popülasyonu. Kimerik reseptörler, B hücresi reseptörünün transmembran ve hücre içi sinyal alanına kaynaşmış spesifik bir reseptörün hücre dışı alanını içerir.
Hedef hücrelerdeki ligandlar, BW hücrelerinin kimerik reseptörlerinin hücre dışı alanı ile etkileşime girer ve BW hücrelerinde hücre içi sinyal alanı aktivasyonuna neden olur. Bu, aşağı akış sinyalizasyonunu ve sitokinlerin üretimini tetikler - BW hücrelerinin dışına salınan ve medyada görünen salgı raportör molekülleri.
Plakayı santrifüjleyin. Sitokin içeren süpernatanı, anti-sitokin antikorları ile önceden kaplanmış bir ELISA plakasına aktarın. Sitokinler, antikorların Fab bölgeleri ile etkileşime girerek plaka yüzeyinde immobilizasyonlarına yol açar.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için plakaya bir bloke edici solüsyon uygulayın. Önceden bağlanmış sitokinlerle etkileşime giren ve bağışıklık kompleksleri oluşturan biyotinile anti-sitokin antik
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin