Reseptör-ligand etkileşimlerini ölçmek için biyomembran kuvvet probu

Bir T hücresi reseptörü, TCR ve antijen sunan bir hücre olan APC üzerinde MHC veya majör histouyumluluk kompleksi tarafından sunulan bir antijenik peptit arasındaki etkileşim, T hücresinin APC üzerinde mekanik bir kuvvet uygulamasına neden olur. Bu fenomen T hücresi aktivasyonu için gereklidir.

Bir biyomembran kuvvet probu (BFP) kullanarak reseptör-ligand etkileşimlerini ölçmek için, slayt tabanlı özel bir hücre odası ile başlayın. Hücre odasını mikroskop altına yerleştirin.

Biyotinile şişmiş RBC'lerin süspansiyonlarını, peptit bağlı MHC-streptavidin-biyotin kompleksleri ile kaplanmış prob cam boncuklarını ve T hücrelerini odaya enjekte edin. Probu, hedefi ve yardımcı tampon dolgulu mikropipetleri haznenin etrafına yerleştirin.

Prob pipeti ile biyotinile edilmiş bir RBC'yi boş bir alana yerleştirin. Hedef mikropipet ile bir T hücresini aspire edin ve onu RBC'nin sağına yerleştirin. Yardımcı mikropipet ile bir prob boncuğu aspire edin ve RBC'nin tepesine takın. Boncuğun streptavidini, RBC'nin biyotinine bağlanır ve bir kuvvet probu oluşturur.

TCR'nin ligandı - MHC'ye bağlı peptit - ve RBC'ye kuvvet uygulamak için T hücresi ile etkileşime girmesine izin vermek için T hücresini kuvvet