JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:05 dk. • July 8th, 2025
Guanin nükleotid bağlayıcı proteinler - bir GTPaz kategorisi - GTP'ye bağlı aktif bir form ile GDP'ye bağlı aktif olmayan bir form arasında geçiş yapan moleküler bir anahtar olarak işlev görür.
Aktif GTPazlar belirli protein ortaklarına bağlanır. Bu ortaklar, GTPases'te aynı bağlama sitesi için rekabet eder.
Rekabetçi bağlamayı incelemek için, manyetik boncuklar üzerinde hareketsiz hale getirilmiş GTP'ye bağlı GTPaz'ın bir süspansiyonunu alarak başlayın. İlk etkileşim ortağını ekleyin - floresan etiketli protein A. Boncukları süspansiyonda tutmak için çalkalama altında inkübe edin. Protein A, tüm GTPaz molekülleri üzerindeki bağlanma bölgelerini bağlar ve doyurur.
Bu çözeltiyi birden fazla tüpe eşit olarak bölün. Tüplere artan miktarlarda ikinci bir etkileşim ortağı - floresan etiketli protein B - ekleyin. Ajitasyon altında inkübe edin.
Protein B, GTPazlar üzerindeki aynı bağlanma bölgesine bağlanır - protein A'nın yerini rekabetçi bir şekilde alır.
Bir taraftaki boncukları toplamak için tüpleri manyetik bir alana maruz bırakın. Bağlanmamış proteinleri çıkarmak için süpernatanı atın. Protein kompleksli boncukları uygun bir tampon içinde yeniden süspanse edin ve bağlı proteinleri öl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin