JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:08 dk. • July 8th, 2025
Mast hücreleri — özel beyaz kan hücreleri, beta-hekzosaminidaz gibi lizozomal enzimler açısından zengin salgı granülleri içerir.
Mast hücre degranülasyonunu gerçekleştirmek için - salgı granüllerinin salınmasını içeren bir işlem, immünoglobulinlerle önceden muamele edilmiş bir murin peritoneal mast hücresi süspansiyonu içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Hücreleri bir hedef kimyasalla tedavi edin. Uyarıcı potansiyele sahip hedef kimyasal, mast hücrelerinin spesifik reseptörleri üzerindeki önceden bağlanmış immünoglobulinlerle etkileşime girer. Bu, beta-heksosaminidaz içeren granüllerin hücre yüzeyine hareketini aktive eder ve onu çözeltiye bırakır.
Hücreleri peletlemek için plakayı santrifüjleyin ve enzim içeren süpernatanı taze bir plakanın boş bir kuyusuna aktarın. Hücreleri parçalamak ve içeriklerini hücre içi beta-heksosaminidaz dahil olmak üzere lizata bırakmak için hücre peletlerini bir lizis tamponu ile muamele edin.
Enzim içeren lizatı aynı çok kuyulu plakanın başka bir kuyucuğuna ekleyin. Her iki kuyucuğu da enzimin substratı, p-nitrofenil-asetil-D-glukozamin ile tedavi edin ve inkübe edin. Enzimler substratları hidrolize eder ve çözeltiyi sarı yapan renkli bir ürün
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin