JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:53 dk. • July 8th, 2025
Kupffer hücreleri, karaciğeri enfeksiyonlardan korumaya yardımcı olan karaciğer sinüzoidlerinde lokalize olan yerleşik makrofajlardır.
Fare Kupffer hücrelerini izole etmek için, orta içerikli bir tabakta taze hasat edilmiş perfüze edilmiş bir fare karaciğeri alın. Kollajenaz ile karaciğer perfüzyon basamağı, hücre dışı matrisi sindirerek karaciğer hücresi ayrışmasına neden olur.
Parankimal hücreler, PC'ler ve parankimal olmayan hücreler, Kupffer hücreleri, endotel hücreleri, yıldız hücreleri ve kalan eritrositler dahil olmak üzere NPC'ler dahil olmak üzere ayrışmış karaciğer hücrelerini serbest bırakmak için karaciğer kapsülünü yırtın.
Kalıntıları temizlemek için filtreleyin. PC'leri seçici olarak çökeltmek için süzüntü üzerinde düşük hızlı diferansiyel santrifüjleme gerçekleştirin. NPC içeren süpernatanı toplayın. Hücreleri konsantre etmek için santrifüjleyin.
Hücreleri ortamdaki yeniden askıya alın ve farklı yoğunluklarda iki gradyan ortam katmanı ile süreksiz bir izotonik yoğunluk gradyanı üzerinde katmanlayın. Santrifüjleme ile hücreler, gradyan ortamına göre yoğunluklarına göre ayrılır.
Degrade katman interfazında zenginleştirilmiş NPC katmanını toplayın. Orta içeren bir tüpe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin