İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Makrofajlara Farklılaşması

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

0 görüntüleme • 4:56 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yetişkin somatik hücreler, kök hücre benzeri farklılaşmamış ve proliferatif durumlar sergileyen indüklenmiş pluripotent kök hücreler, iPSC'ler elde etmek için genetik olarak yeniden programlanabilir.

İnsan iPSC'lerini makrofajlara (patojenleri ve hücresel kalıntıları fagositoz eden beyaz kan hücreleri) ayırmak için, hücre dışı yapışkan bir yüzeye sahip bir kültür plakası ile başlayın.

Büyüme faktörleri, kemik morfogenetik proteini, kök hücre faktörü ve vasküler endotelyal büyüme faktörünü içeren ortamı ekleyin. iPSC'leri tohumlayın ve kuluçkaya yatırın.

Yapışkan olmayan yüzey, iPSC bağlanmasını önler ve hücreleri süspansiyon halinde tutar, bu da üç boyutlu embriyoid cisimlere (EB'ler) agregasyonu kolaylaştırır. Büyüme faktörleri, EB'ler içinde mezodermal soy hücrelerine iPSC farklılaşmasını başlatır.

Farklılaşmış EB'leri bir santrifüj tüpüne aktarın. Yerçekimi ile yerleşmelerine izin verin. EB'leri interlökin-3, IL3 ve makrofaj koloni uyarıcı faktör, CSF1 içeren taze ortamda yeniden süspanse edin. EB'leri jelatin kaplı bir hücre kültürü plakası üzerine yerleştirin.

Hücre dışı bir matris proteini olan jelatin, EB bağlanmasını kolaylaştırır. IL3, EB'leri hematopoietik kök progenitör hücrelere farklılaşması için uyarır ve miyeloid hücrelere yol açar. CSF1, miyeloid hücre proliferasyonunu ve bunların ortamda salınan ve süspansiyon halinde kalan makrofaj öncülerine farklılaşmasını destekler.

Süspansiyon hücrelerini ve santrifüjü toplayın. CSF1 takviyeli ortamdaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücreleri kaplanmamış kültür plakaları üzerine yerleştirin.

CSF1, makrofaj öncüllerinin tamamen işlevsel, yapışık olgun makrofajlara terminal farklılaşmasını indükler.

Sıfırıncı günde farklılaşma işlemine başlamak için, ultra düşük ataşmanlı 6 oyuklu bir plakanın iki kuyusuna 2,25 mililitre aşama 1 ortamı ekleyin. Ardından, 6 oyuklu bir plakada iPSC'lerin %180 birleşik kuyusu için bakım ortamını 1,5 mililitre aşama 1 ortamıyla değiştirin. Yeni bir hücre pasaj aracı kullanarak kolonileri kesin. Bir pipet kullanarak, kesilen kolonileri ultra düşük bağlantılı 6 oyuklu plakanın iki kuyusuna aktarın.

2. günde, iki gün embriyoid cisimciklerini içeren 6 oyuklu plakaya 0,5 mililitre hESC-SFM ortamı ekleyerek sitokin konsantrasyonlarını ayarlayın.

4. günde, 6 oyuklu bir doku kültürü plakasının dört oyuğunu% 0.1 jelatin ile kaplayın. En az 10 dakika inkübe ettikten sonra jelatini çıkarın ve 2,5 mililitre 2. aşama ortamı ekleyin.

Oluşan embriyoid cisimciklerini 6 oyuklu bir plakanın iki kuyusundan toplayın ve bunları 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin. Yerçekimi ile tüpün dibine yerleşmelerine izin verin. Daha sonra, ortamı tüpten dikkatlice aspire edin ve embriyoid cisimciklerini 2 mililitre aşama 2 ortamında yeniden süspanse edin.

10 ila 15 embriyoid cisimleri, 2.5 mililitre aşama 2 ortamı içeren jelatin kaplı bir kuyucuğa aktarın ve% 5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede inkübe edin. İki ila üç hafta boyunca, medyayı her üç ila dört günde bir değiştirin.

EB'lerin kaplanması çok önemlidir. 10'dan az veya 15'ten fazla EB'ye sahip olmak veya bunların eşit olmayan bir şekilde dağılmış olması, düşük makrofaj verimine yol açabilir.

İki ila üç hafta sonra, embriyoid cisimler yapışık olmayan hematopoietik hücreleri süspansiyona bırakmaya başlar. 40 mikrometrelik bir süzgeç kullanarak, bu hücreleri 50 mililitrelik bir tüpe toplayın ve ardından ortamı doldurun. Hematopoetik hücrelerin süspansiyonunu üç dakika boyunca 200 x g'da santrifüjleyin.

Hematopoietik hücreleri evre 3 ortamında yeniden süspanse edin. Ardından, hücreleri mililitre başına 0.2 x 106 yoğunlukta kaplayın. Aşama 3 ortamını her beş günde bir değiştirin.

Dokuz ila 11 gün sonra makrofajlar tamamen farklılaşacak ve tamamen işlevsel hale gelecektir.

06:21

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:38

Hasta Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinden İnsan Kardiyomiyositlerinin Üretimi ve Genişlemesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:19

İnsan Mikroglia Benzeri Hücreler: İnsan Sinaptozomları Kullanılarak İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden ve In Vitro Canlı Hücre Fagositoz Analizinden Farklılaşma

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:05

Monosit Kaynaklı Hücrelerin Makrofaj Benzeri Hücrelere Farklılaşması ve Polarizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:03

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Mikroglia Benzeri Hücrelere Farklılaştırılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:42

Bir In vitro Model

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:32

İnsan Çift Gradient Santrifüj ile Monositlerinde ve teflon kaplı Hücre Kültürü Çantalar Makrofagların Onların Farklılaşma İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:46

Makrofaj koloni stimüle edici faktör farklılaştırılmış insan monosit türevli makrofajlar Kültür

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:05

Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Makrofajlarının Üretimi ve Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:03

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Olgun Bir İmmün Fenotipli Beyin Mikrovasküler Endotel Hücre Benzeri Hücrelere Farklılaşması

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026