JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 6:56 dk. • July 8th, 2025
Dorsal kök ganglionu veya DRG, omurilik boyunca periferikten merkezi sinir sistemine duyusal bilgi taşıyan bir nöronal hücre gövdeleri kümesidir. Periferik sinir yaralanması DRG'de makrofaj birikimine ve nöropatik ağrı gelişimine neden olur.
Enzim içermeyen bir yöntem kullanarak canlı makrofajları izole etmek için, hücresel stresi sınırlamak için buz gibi soğuk tamponla doldurulmuş bir homojenizatörde taze disseke fare DRG dokusunu alın. Bir havaneli kullanarak, hücreleri serbest bırakmak için dokuyu mekanik olarak homojenize edin.
Hücre kümelerini çıkarmak ve akışta tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için bir hücre süzgecinden süzün. Doku homojenatı, makrofajları ve nöronların yalıtkan kılıfı olan serbest yüzen miyelini içeren nöronları ve nöronal olmayan hücreleri içerir.
Filtrelenmiş homojenatı, yoğunluk gradyanlı bir ortam ve santrifüj içeren bir tüpe ekleyin. Merkezkaç kuvveti altında, daha yüksek kaldırma kuvveti yoğunluğuna sahip canlı hücreler, miyelin askıda kalırken, bir pelet oluşturmak için tüpün dibine yerleşir. Süpernatanı atın.
Hücreleri, makrofaj spesifik hücre yüzeyi reseptörlerine karşı florofor konjuge antikorlar içeren bir tamponda yeniden süspanse edin. İst
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin