JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:45 dk. • July 8th, 2025
Periferik kan mononükleer hücreleri, PBMC'ler, lenfositler, monositler ve dendritik hücreler dahil olmak üzere heterojen bir özelleşmiş bağışıklık hücresi popülasyonundan oluşur.
PBMC'leri izole etmek için, yeni elde edilmiş bir insan buffy coat kanı içeren bir tüp ile başlayın. Buffy coat kanı, çok loblu çekirdekli granülositler, eritrositler ve plazmada süspanse edilmiş trombositler ile birlikte PBMC'leri içerir.
Buffy coat süspansiyonunu, PBMC ayrımı için en uygun olan istenen özgül yoğunluğa sahip eşit hacimde bir yoğunluk gradyan ortamı üzerine dikkatlice yerleştirin.
Santrifüjleme sırasında, farklı hücre tipleri, gradyan ortamına göre hücre yoğunluklarına bağlı olarak farklı katmanlara ayrılır. Ek olarak, yoğunluk gradyan ortamındaki polisakkaritler, eritrosit agregasyonunu ve sedimantasyonunu teşvik eder.
Daha yüksek yoğunluklu eritrositler ve granülositler tüpün dibine çökerken, en düşük yoğunluğa sahip plazma en üst tabakayı oluşturur. Yoğunluk gradyan ortamından daha düşük yoğunluklara sahip olan PBMC'ler, plazma yoğunluğu gradyan ortamı arayüzünde bulutlu beyaz bir tabaka oluşturur.
Üst plazma tabakasını çıkarın. PBMC'leri içeren bulanık tabakayı dikkatlice toplayın ve s
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin