JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:20 dk. • July 8th, 2025
Antikor salgılayan B hücreleri veya ASC'ler, patojenlere karşı koruma sağlamak için IgG ve IgM dahil olmak üzere antikor izotiplerini salgılayan farklılaşmış B hücreleridir.
ASC'lerin in vitro fonksiyonel bir değerlendirmesini yapmak için, enzime bağlı immünosorbent nokta testi ile başlayın. Tabanda aktif bir poliviniliden florür zarı içeren bir ELISpot plakası alın.
Kuyucukları, antikorun Fc bölgesi olmadan yalnızca Fab bölgeleri içeren poliklonal antikor fragmanları ile inkübe edin. Her Fab bölgesi, her iki izotipin tanımlanmasını sağlayan spesifik antikor izotipleri - IgG veya IgM için bir bağlanma bölgesine sahiptir.
İnkübasyon sırasında, antikor parçaları zara yapışır ve immobilizasyona yol açar.
Spesifik olmayan bağlanmayı önlemek için kuyuları engelleme solüsyonlarıyla kaplayın. Plakayı aktive edilmiş antikor salgılayan B hücreleri ile tohumlayın ve inkübe edin. ASC'ler, zara bağlı antikor fragmanlarına bağlanan IgG ve IgM dahil olmak üzere farklı izotipler salgılar.
Bağlanmamış salgılanan antikorları çıkarmak için plakayı bir tamponla yıkayın. Bazı kuyucukları IgM için enzim konjuge tespit antikorları ve diğerlerini IgG için tespit antikorları ile tedavi edin ve inkübe edin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin