İn Vitro Fare Kemik İliği Stromal Hücrenin Adipositlere Farklılaşması

Adipositler veya yağ depolayan hücreler, bağışıklık tepkisini düzenleyen bağışıklık sinyal molekülleri olan adipokinleri salgılayan yağ dokusunun baskın hücreleridir.

İn vitro adipositler oluşturmak için, fare kemik iliği stromal hücreleri, BMSC'ler, — farklılaşmamış multipotent hücrelerin yapışık bir kültürünü içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

Hücreleri, hücrelerin farklılaşmasını tetiklemek için fosfodiesteraz enzim inhibitörleri ve deksametazon (sentetik bir glukokortikoid) içeren bir adiposit indüksiyon ortamı ile tedavi edin.

İnhibitörler hücrelere girer ve siklik adenozin monofosfatın veya cAMP'nin parçalanması için gerekli enzimler olan siklik nükleotid fosfodiesterazları devre dışı bırakır. Bu inhibisyon, hücre farklılaşması için kritik olan hücre içi cAMP seviyelerinin artmasına neden olur.

Deksametazon, BMSC'lerdeki hücre içi reseptörlere bağlanır ve lipid sentezi ve birikiminde yer alan genleri aktive etmek için çekirdeğe girer. Bu, BMSC'lerin olgun adipositler için öncü hücreler olan preadipositlere farklılaşmasını indükler.

Preadipositleri korumak için harcanan ortamı yeni bir indüksiyon ortamı ile değiştirin. Belirli bir süre sonra, hücreleri yüksek glikoz ve insülin içeren bir adiposit baz ortamı ile tedavi edin.

İnsülin, spesifik hücre yüzeyi reseptörlerine bağlanır ve hücre yüzeyindeki glikoz taşıyıcılarının translokasyonunu aktive ederek preadipositlere glikoz alımını kolaylaştırır. Hücreler, lipid damlacıklarını sentezlemek için fazla glikoz kullanır ve bu da olgun adipositlere farklılaşmayı teşvik eden adipogeneze - lipit birikimi sürecine - yol açar.

Hücrelere lipit lekeleyen bir boya uygulayın ve bunları ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Olgun adipositler, çok sayıda kırmızı lipid damlacıklarına sahip yuvarlak hücreler olarak görünür.

Kemik iliği kök hücre adiposit farklılaşmasını indüklemek için, birleşik bir kemik iliği hücre kültürünün hücre kültürü ortamını adiposit indüksiyon ortamı ile değiştirin. İki günlük kültürden sonra, süpernatanı taze adiposit indüksiyon ortamı ile değiştirin ve 4. günde adiposit bazlı ortama geçin. 7. günde, hücrelerin birikmiş lipid damlacıklarına sahip olduğunu ve fenotip görüntüsünün olgun adipositlere benzer olduğunu doğrulayın.