JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:42 dk. • July 8th, 2025
Marjinal hepatik, MH, lökositler, endotel hücreleri tarafından kaplanmış özel karaciğer kan damarlarının veya sinüzoidlerin duvarlarına yapışık olarak bulunur. MH lökositleri, iltihaplanmaya yanıt olarak çevre dokuya alınır.
MH lökositlerini hasat etmek için, sırtüstü pozisyonda ötenazi yapılmış bir fare ile başlayın. Karaciğer ve kardiyopulmoner kompleksi açığa çıkaran periton ve göğüs boşluklarını kesin.
Dalak, gastrointestinal sistem ve ilişkili organlardan karaciğere kan taşıyan portal veni ortaya çıkarmak için bağırsakları yerinden çıkarın. Portal ven içine peristaltik bir pompaya bağlı bir iğne yerleştirin.
Perfüzyon sırasında perfüzatı toplamak için oksijensiz kanı karaciğerden kalbe taşıyan önemli bir kan damarı olan inferior vena kava'yı inceleyin.
Karaciğeri, kısa bir süre için düşük bir akış hızında antikoagülan içeren tampon ile portal ven yoluyla perfüze edin. Bu adım, karaciğerin kan damarlarından inferior vena kava çıkışı yoluyla yapışık olmayan hücrelere sahip kanın çıkarılmasına yardımcı olur. Kanla kontamine olmuş bu parfümü atın.
Şimdi, daha yüksek bir akış hızında perfuse. Artan akış ve kesme hızlarında zorlanmış perfüzyon, MH lökositleri ile kan damarı iç astarı arasındaki yapışmayı bozar, böylece MH lökositlerini sinüzoidal duvardan ayırır.
MH lökositleri ve diğer kan hücrelerini içeren perfüzatı toplayın ve yeni bir tüpe aktarın. Merkezkaç. Daha fazla aşağı akış analizi için MH lökositleri içeren peleti yeniden süspanse edin.
Fare marjinal-hepatik lökositleri toplamak için, solunumun kesilmesinden hemen sonra, ksifoid sürecine kadar orta hat abdominal insizyon yapmak için steril makas ve diş dokusu forsepsleri kullanın. Daha sonra, sternumu kaldırmak için forseps kullanın ve diyaframı ve göğüs kafesini her iki taraftan dikkatlice kesin.
Sternuma bir hemostat yerleştirin ve kardiyopulmoner kompleksi ortaya çıkarmak için göğüs kafesini rostral olarak katlayın. Bağırsakları karın boşluğunun dışına, hayvanın soluna doğru hareket ettirin ve portal veni açığa çıkarın. Ardından, 30 gauge bir iğneyi peristaltik bir pompaya bağlayın ve dalak venine rostral olan portal ven içine yerleştirin.
Perfüzatın göğüs boşluğundan drenajına ve toplanmasına izin vermek için diyaframın üzerindeki inferior vena kava'yı kesin. Daha sonra, peristaltik pompayı dakikada yaklaşık 3 mililitre hızında açın ve ilk mililitre kanla kontamine perfüzat göğüs boşluğu havuzundan toplayın. 3 mililitre toplandığında pompayı kapatın.
Daha sonra, 10 mililitrelik bir şırıngaya bağlı 21 gauge kelebek iğneyi yerleştirdikten sonra, göğüs boşluğundan 10 mililitre perfüzat toplanana kadar perfüzyonu dakikada 4 mililitreye kadar bir hızda yeniden başlatın. Karaciğer açık kahverengiye döndüğünde, perfüzyonu sonlandırın. Daha sonra, perfüzatı 15 mililitrelik bir tüpe aktarın. Santrifüjleyin ve ardından süpernatanı aspire edin.