Akış Sitometrisi ile İnsan Sitokin ile İndüklenen Öldürücü Hücrelerin CD İşaretleyici Tanıması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 5:35 dk. • July 8th, 2025
Sitokin ile indüklenen öldürücü CIK hücreleri, spesifik sitokinler ve monoklonal antikorlar ile uyarılan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) kültürlerinden ex vivo olarak üretilen heterojen immün hücre popülasyonlarıdır. CIK hücreleri, CD3+CD56+ NK-T hücreleri, CD3+CD56-T hücreleri ve CD3-CD56+ NK hücreleri dahil olmak üzere hücre popülasyonlarını içerir.
CIK hücre oranını belirlemek için, PBMC'den türetilmiş bir CIK hücre süspansiyonu içeren tüplerle başlayın. Farklı floroforlara konjuge edilmiş anti-CD3 ve anti-CD56 antikorlarını ve bunların karışımlarını belirlenen tüplere ekleyin. Benzer floroforlara konjuge izotip kontrol antikorlarını diğer tüplere spesifik antikorlar olarak ekleyin.
Floresan işaretli anti-CD3 ve anti-CD56 antikorları, CIK hücre popülasyonlarında eksprese edilen CD3 ve CD56'yı tanır ve bunlara bağlanır. İzotip kontrol antikorları, spesifik olmayan arka plan sinyali ölçümlerini kolaylaştıran hedef antijen özgüllüğünden yoksundur.
Hücreleri, hücre agregalarının çıkarılmasına yardımcı olan hücre süzgeç kapaklı yuvarlak tabanlı tüplere pipetleyin. Tüpleri bir akış sitometresi karuseline yükleyin. Çalışma sırasında her hücre kanaldan geçer ve lazer ışınlarıyla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin