JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:49 dk. • July 8th, 2025
Makrofaj hücre dışı tuzaklar, MET'ler, patojenleri yakalamak ve ortadan kaldırmak için makrofajlar tarafından salınan ağ benzeri yapılardır.
MET'ler, matris metalloproteinaz-9, MMP-9 ve sitrüline histon H3, H3Cit ile ilişkili hücre dışı kromatin liflerini içerir - argininin sitrüline dönüştürüldüğü modifiye edilmiş bir histon proteini.
Formalinle sabitlenmiş, parafine gömülü murin akciğer dokusu bölümlerinde MET'leri karakterize etmek için öncelikle slaytları kurutun. Bölümleri deparafinize etmek için ksilene daldırın. Bölümleri yeniden sulandırmak için sulu etanol kullanın.
Formalin ile indüklenen protein çapraz bağlarını kırmak için bölümleri ısıtın ve hedef antijenleri sonraki antikor bağlanması için açığa çıkarın.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke etmek için protein içeren bir çözelti ekleyin. Anti-MMP-9, anti-H3Cit ve anti-F4 / 80 birincil antikorlarından oluşan bir kokteyl ile inkübe edin.
Anti-F4/80 antikoru, makrofaj hücre yüzeyi glikoproteini F4/80'e bağlanır. Anti-MMP-9 ve anti-H3Cit antikorları, MET'lerde sırasıyla MMP-9 ve H3Cit'e bağlanır. Hedeflerine bağlı ilgili birincil antikorlarına bağlanan farklı florofor konjuge ikincil antikorlar ekleyin.
Bölümleri DA
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin