JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:50 dk. • July 8th, 2025
Hücresel mikropartiküller, apoptoz geçiren ökaryotik hücrelerin plazma zarından salınan biyomolekülleri çevreleyen mikron altı boyutlu zara bağlı veziküllerdir.
T lenfosit türevi mikropartiküller, LMP'ler in vitro olarak üretmek için, T lenfosit kültürü içeren bir kültür şişesi alın. Bir antibiyotik olan aktinomisin-D ekleyin. Uygun bir süre kuluçkaya yatırın.
Aktinomisin-D lenfositlere girer ve çekirdeğe yer değiştirir. Spesifik DNA baz çiftleri arasında interkalasyon yaparak transkripsiyonu inhibe eder. Bu, hücre döngüsünün durmasına yol açar ve apoptotik yolu aktive eder.
Apoptozun başlangıcında, aktive edilmiş kaspaz-3, rho ile ilişkili kinaz, ROCK1'i parçalar ve aktive eder. ROCK1, sırayla, aşağı akış hedef proteinlerini fosforile ederek aktomiyosin kasılmasına neden olur, bu da zar kanamasına ve ardından sitozolik ve nükleer bileşenleri içeren LMP'lerin ortama salınmasına yol açar.
Hücreler sonunda apoptoza uğrar.
İnkübasyon sonrası, kültür ortamını taze bir tüpe aktarın. T lenfositlerini peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın.
Büyük hücre kalıntılarını temizlemek için santrifüjleyin. LMP'leri içeren süpernatanı bir şişeye aktarın. LMP'leri peletlem
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin