JoVE Encyclopedia of Experiments
İmmünoloji
0 görüntüleme • 3:51 dk • July 8th, 2025
Nötrofiller — çok loblu çekirdeğe sahip bağışıklık hücreleri, istilacı patojenleri yutarak trakeal bağışıklığı düzenler.
Nötrofilleri trakeal sekresyondan ayırmak için, spiral bir mikroakışkan kanalla başlayın.
Spiral kanal, merkezi girişten kaynaklanır, kademeli olarak genişler ve iç ve dış duvar çıkışlarına doğru çatallanır. Çatallanma kanalı, verimli bir ayırma sağlayan değişen kalınlıklara sahiptir. Her kavisli kanal, dış duvar yüksekliği iç duvarınkinden daha büyük olan ve değişken bir akış modeli oluşturan bir yamuğu andırır.
Girişi, tesadüfi kirleticiler olarak müsin agregatları, nötrofiller ve eritrositler içeren önceden filtrelenmiş, seyreltilmiş bir insan trakeal salgısı ile doldurun. Numuneyi, hücrelerin ve agregaların dağılmasına yol açan spiral mikro kanaldan belirli bir akış hızında akıtın.
Hücreler trapez kanalından geçerken, Dean sürüklemesi ve atalet kaldırma kuvvetlerine maruz kalırlar. Bu iki kuvvet arasındaki etkileşim, hücreleri boyutlarına göre ayıran bir denge oluşturur. Sonuç olarak, daha büyük boyutlu nötrofiller kanalın iç duvarının yakınında birikirken, eritrositler ve müsin agregatları kanalın dış duvarının yakınında kalır.
Son olarak, nötrofiller daha geniş kanaldan geçer ve iç duvar çıkışında toplanır.
Buna karşılık, dar kanal, dış duvar çıkışında eritrositleri ve müsin agregalarını toplayarak verimli nötrofil ayrımı sağlar.
9 mililitre fosfat tamponlu salin içinde 1 mililitre hava yolu sekresyon örneği toplamak için 10 mililitrelik bir şırınga kullanın. Daha sonra künt bir pipet yardımıyla mukus örneğini homojenize edin. Ardından, seyrelticiyi süzmek için 40 mikrometrelik bir naylon hücre süzgeci kullanın ve büyük doku parçalarını veya kan pıhtılarını çıkarın. Süzme tamamlandıktan sonra numuneyi buzun üzerine koyun.
Ardından, 1.000 kez seyreltilmiş numuneden oluşan bir nihai konsantrasyon elde etmek için 0,5 mililitrelik numune seyrelticisine 50 mililitre fosfat tamponlu salin ekleyin. Dört spiral mikro kanalın her birine eşit akış uygulamak için PDMS çipini monte etmek için sıvı kılavuzunu kullanın. Ardından, sıvı kılavuzunun girişine, iç duvar çıkışına ve dış duvar çıkış portlarına bağlanmak için 1/16 inç çapında bir erkek luer konektörü kullanın.
Ardından, numune süspansiyonuna bir silikon boru bağlayın. Ardından, peristaltik pompayı giriş borusuna bağlayın. Dış duvar çıkış borusunu atık haznesine yerleştirin. Ardından giriş borusunun ucunu ve iç duvar çıkış borusunu numune haznesine yerleştirin.
Boruyu yerleştirdikten sonra, numune haznesinde kalsiyum ve magnezyum içermeyen 5 mililitre fosfat tamponlu tuzlu su ile doldurulmuş 50 mililitrelik bir tüp bırakın. Ardından, cihazı doldurmak için dakikada yaklaşık 1 mililitre akış hızında pompalamaya başlayın.
Numuneyi numune haznesine yerleştirdikten sonra peristaltik pompayı çalıştırın ve akış hızını dakikada 4 mililitre olarak ayarlayın. Numune hacmi yaklaşık 1 ila 2 mililitre olan istenen hacme ulaştıktan sonra, işlemi durdurun ve hortumun bağlantısını kesin.