GM-CSF Üreten T Yardımcı Hücrelerini Naif T Hücrelerinden Ayırt Etmek İçin İn Vitro Bir Teknik

Granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör, GM-CSF, GM-CSF üreten T yardımcısı veya T_HGM hücreleri tarafından salgılanır. Bu hücreler, diğer T yardımcı hücresine özgü sitokinlerin düşük bir ekspresyonunu gösterir.

T_HGM hücrelerinin in vitro farklılaşmasına başlamak için, antijenle aktive olmuş olgun hücreler ve farklılaşmamış saf hücreler içeren fare dalağından izole edilmiş bir T yardımcı hücre süspansiyonu alın.

Naif ve olgun hücrelerin karakteristik yüzey belirteçlerini hedefleyen floresan etiketli antikorlar ekleyin. Naif T hücrelerini izole etmek için floresanla aktive edilen hücre sıralaması yapın.

Hücreleri, T hücresi reseptör kompleksine bağlanan antikorlarla kaplanmış bir kuyuda kaplayın. Ko-stimülatör reseptöre bağlanan bir antikor ekleyin. Sinerjik bağlanma hücreleri aktive eder.

Bir sitokin olan interlökin 7'yi ekleyin, bu da TH_,GM hücrelerine ve GM-CSF üretimine farklılaşmayı indükler. Phorbol miristat asetat, PMA - bir pro-inflamatuar bileşik, iyonomisin - bir kalsiyum iyonofos ve bir protein taşıma inhibitörü ekleyin.

PMA hücreye girer ve bir protein kinazı aktive eder. Zar geçirgen iyonomisin, hücre içindeki kalsiyum iyonlarını yer değiştirir ve hücre içi kalsiyum ko