Donmuş Embriyonik Nöronlardan Düşük Yoğunluklu Primer Nöron Kültürü Oluşturma
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:24 dk. • July 8th, 2025
Dondurularak saklanmış embriyonik nöronlar içeren bir kriyoviyal ile başlayın ve kontrollü çözülme için bir ısıtma bloğuna yerleştirin.
Daha sonra, çözülmüş nöronları bir tüpe aktarın ve ozmotik basıncı dengelemek ve hücre lizizini önlemek için bunları bir nörobazal ortamla damla damla seyreltin.
Bu, düzgün dağılmış nöronlarla homojen bir süspansiyon oluşturur.
Seyreltilmiş nöral süspansiyonu, besinler ve antibiyotiklerle zenginleştirilmiş bir nörobazal ortam içeren poli-L-lizin kaplı çok kuyulu bir plaka üzerine tohumlayın.
Pozitif yüklü poli-L-lizinin, elektrostatik etkileşimler yoluyla nöronlarla etkileşime girmesine izin vermek için inkübe edin ve yapışmalarını kolaylaştırın.
Kuyucukları taze nörobazal ortamla besleyin.
Ortamın buharlaşmasını önlemek için hücreleri aynı ortamda nemli koşullar altında inkübe edin.
Embriyonik nöronlar besinleri kullanır ve nöronal süreçler geliştirerek ve birincil nöronlar oluşturarak büyür.
Nörobazal ortam, geniş aralıklı görünen birincil nöronları korur ve nöronal bağlantılara sahip düşük yoğunluklu bir birincil kültür oluşturur.
96 oyuklu bir mikroplakayı oyuk başına 100 mikrolitre poli-L-lizin ile kaplayarak başlayın. Daha sonra, plakaları ge
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin