Zebra Balığı Nöral Kök Hücrelerinden Primer Nörosferlerin Üretilmesi ve Farklılaşması

Büyüme faktörleri ile zenginleştirilmiş bir büyüme ortamı içeren çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

Zebra balığı nöral kök hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonunu tohumlayın ve kuluçkaya yatırın.

Başlangıçta, kök hücreler büyüme faktörlerini kullanır ve çoğalır.

Serbest yüzen birincil nörosferler oluşturmak için sürekli hücre proliferasyonunu ve spontan agregasyonu teşvik etmek için kalıntıları çıkarın ve taze ortamı ekleyin.

Daha sonra, nörosferleri büyüme ortamını içeren taze bir kuyuya aktarın.

Nörosferlerin ilerleyici bir şekilde genişlemesini sağlamak için aynı koşullar altında kuluçkaya yatırın.

Nörosferleri mekanik olarak küçük kümelere ayırmak için tekrar tekrar pipetleyin.

Daha sonra, yapışmalarını kolaylaştırarak onları hücre dışı bir matris kaplanmış kuyu üzerine aktarın.

Büyüme ortamını, insülin içeren büyüme faktörü içermeyen bir farklılaşma ortamı ile değiştirin.

Büyüme faktörlerinin yokluğu ve insülinin varlığı, nöronal projeksiyonlarla glial hücrelere ve nöronlara hücre farklılaşmasını uyarır.

Nörosfer oluşumuna hazırlanmak için, 24 oyuklu bir plakanın her bir kuyusunu 300 mikrolitre taze Z-koşulu ortamı ile doldurun. Daha sonra, her bir oyuğa 200 mikrolitre hüc