İnsan Beyni Organoidlerini Oluşturmak için İn Vitro Bir Yöntem

Bir nörosfer kültürü, serbest yüzen nöroepitelyal progenitör hücre kümeleri ile başlayın.

Bu nöroküreleri bir gömme tabakasına aktarın.

Medyayı çıkarın. Her nörosfere proteinler ve büyüme faktörleri içeren bir damla hücre dışı zar matrisi ekleyin.

Matrisin katılaşması için kuluçkaya yatırın, nörosferleri içine gömün.

Şimdi, nörosfer ortamını kullanarak matrise gömülü nörosferleri, nörosfer ortamı içeren bir kültür plakasına aktarın.

Kuluçkaya yatmak. Hücre dışı membran matriksi ve bileşenleri, nöroepitelyal progenitör hücrelerin çoğalan ve sıvı dolu lümenler oluşturan nöroepitelyal hücrelere farklılaşmasını kolaylaştırır.

Kuluçka sonrası, nörosferleri önceden ısıtılmış beyin organoid ortamı içeren bir eğirme şişesine aktarın. Hücresel büyümeyi teşvik ederek gelişmiş oksijen ve besin difüzyonu için karıştırarak inkübe edin.

Ortamdaki büyüme faktörleri ve küçük molekül inhibitörleri, nöral farklılaşmayı teşvik eder ve olgun beyin organoidleri oluşturarak belirli beyin bölgelerinin hücrelerine dönüşür.

Bu işleme başlamak için, daha önce steril makasla kesilmiş 2 milimetrelik bir uç kullanarak nörosferleri 200 mikrolitrelik bir mikropipetle toplayın. Daha sonra, nörosferleri birbirinde