Nöral Kök ve Progenitör Hücrelerin Elektriksel Stimülasyona Bağlı Farklılaşması

Bir elektrik kaynağına bağlı bir MOE mikroakışkan çipi ile başlayın.

Çip, elektrik bağlantıları için monte edilmiş Ag / AgCl elektrotları ile birlikte giriş ve çıkış portlarına bağlı poli-L-lizin kaplı kültür bölgeleri içerir.

Optimum büyüme koşulları için mikroakışkan çipi bir ısıtıcıya yerleştirin.

Nöral kök ve progenitör hücreleri veya NPC'leri çıkışlar yoluyla kaplanmış kültür bölgelerine akış.

Hücreler poli-L-lizin ile elektrostatik olarak etkileşime girer ve mikroakışkan cihaza yapışır.

Daha sonra, yapışan hücrelerin çoğalmasını kolaylaştıran büyüme faktörleri içeren bir büyüme ortamı ekleyin.

Hücre canlılığı için sürekli ortam beslemesi ile Ag / AgCl elektrotları aracılığıyla daha uzun süre bir elektrik akımı uygulayın.

Elektrik akımı, NPC'leri uyarır ve aktive eder, hücre gövdelerinden nöronal süreçlerin uzamasını teşvik eder.

Ek olarak, elektriksel stimülasyon çeşitli hücre içi sinyal yollarını tetikler.

Bu yollar, NPC'leri spesifik olarak nöronlar, astrositler ve oligodendrositler gibi çeşitli nöral hücrelere farklılaşmaya teşvik eder.

Başlamak için, uygun yazılımı kullanarak ayrı PMMA katmanları ve çift taraflı bant için desenler çizin. Karbondioksit lazer yazıcıyı açın ve kişisel bir bilgisayara bağlayın. Yazılımı kullanarak tasarım desen dosyasını açın.

PMMA levhalarını veya çift taraflı bandı lazer çizicinin platformuna yerleştirin. Ardından, Otomatik Odaklama aracını kullanarak lazeri PMMA sayfalarının yüzeyine veya çift taraflı banda odaklayın. Yazıcı olarak lazer yazıcıyı seçin. Ardından, PMMA tabakası veya çift taraflı bant üzerinde doğrudan ablasyonu başlatmak için lazer çiziciyi kullanın.

Koruyucu filmi PMMA tabakalarından çıkarın ve yüzeyi nitrojen gazı kullanarak temizleyin. Birden fazla PMMA tabakası katmanını birbirine yapıştırmak için, üç parça 1 milimetrelik PMMA tabakasını istifleyin ve akış veya elektriksel stimülasyon kanalı düzeneğini oluşturmak için 110 santigrat derecede 30 dakika boyunca bir termal bağlayıcıda santimetre kare başına 5 kilogramlık bir basınç altında birleştirin. Hızlı etkili siyanoakrilat yapıştırıcı ile MOE çip düzeneğinin birinci katmanındaki ayrı açıklıklara 12 parça adaptör yapıştırın.

Çipi monte etmeden önce 1 milimetre PMMA alt tabakalarını, çift taraflı bandı ve 3 milimetre optik dereceli PMMA'yı 30 dakika boyunca ultraviyole ışınlama kullanarak dezenfekte edin. PMMA montajını tamamlamak için 1 milimetrelik PMMA alt tabakalarını 3 milimetre optik dereceli PMMA'ya çift taraflı bantla yapıştırın. Temizlenmiş kapak camını çift taraflı bantla PMMA tertibatına yapıştırın.

Agar köprüsü adaptörlerinin açıklıklarını beyaz parmak sıkı tapalarla kapatın. Düz tabanlı konektörü, orta giriş ve çıkış adaptörleri aracılığıyla MOE çip düzeneğine bağlayın. Ardından, koni-Luer adaptörünü üç musluklara bağlayın. Orta girişin üç musluğuna bağlanan 3 mililitrelik bir şırınga kullanarak 2 mililitre% 0.01 PLL çözeltisi ekleyin ve orta çıkışın üç musluğuna boş bir 3 mililitrelik şırınga bağlayın.

Hücre kültürü bölgelerini PLL çözeltisi ile doldurun ve kaplama çözeltisini yavaşça ileri geri pompalayın. Çözeltiyi kültür bölgelerinin içine kapatmak için iki üç vanayı kapatın. MOE çipini% 5 karbondioksit atmosferi ile doldurulmuş bir inkübatörde gece boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İki üç vanayı açın ve iki şırıngayı kullanarak kaplama solüsyonunu kanalda manuel olarak ileri geri pompalayarak kanallardaki kabarcıkları temizleyin.

Ortam girişinin üç vanasına bağlanan 3 mililitrelik bir şırıngaya 3 mililitre tam ortam çekin ve hücre kültürü bölgelerindeki kaplama çözeltisini değiştirmek için ekleyin. Beyaz parmak geçirmez fişi Luer adaptörüyle değiştirin ve adaptörü doldurmak için %3 sıcak agaroz enjekte edin. Luer-lock şırıngasını Luer adaptörüne bağlayın ve Luer-lock şırıngasını doldurmak için siyah kauçuk çubuktan %3 sıcak agaroz enjekte edin. Agarozun soğuması ve katılaşması için 10 ila 20 dakika bekleyin.

Hücre tohumlu MOE çipini, 37 santigrat derecede tutulan programlanabilir XYZ motorlu bir aşamaya sabitlenmiş şeffaf ITO ısıtıcıya takın. Orta priz aracılığıyla MOE çipine manuel olarak pompalayarak mNPC'leri infüze edin. Ardından, hücre tohumlu MOE çipini ITO ısıtıcı üzerinde 4 saat inkübe edin.

Çip üzerindeki elektrotlar aracılığıyla bir EF çoklayıcıyı MOE çipine bağlamak için elektrik kablolarını kullanın. Kare dalga DC darbeleri vermek için bir EF çoklayıcı ve bir fonksiyon üreteci bir amplifikatöre bağlayın.