Mikroglia'nın Yetişkin Bir Fare Beyninin Korteksinden İzolasyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:48 dk. • July 8th, 2025
Taze hasat edilmiş bir fare beyin korteksini ele alalım.
Dokuyu küçük parçalar halinde doğrayın. Bunları, RNaz inhibitörleri ve DNazlar içeren bir tampon içeren soğutulmuş bir homojenizatöre aktarın.
Hücreleri süspansiyona salmak için dokuyu en uygun şekilde homojenize edin, nöronları ve diğer glial hücreleri ortadan kaldırırken, kesme kuvvetlerine dayanma ve zar canlılığını sürdürme yetenekleri nedeniyle mikrogliaları seçici olarak koruyun.
Ayrıca, RNaz inhibitörleri RNazları bozarken, DNazlar herhangi bir kirletici DNA'yı bozar.
Doku kalıntılarını gidermek için hücre süspansiyonunu bir hücre süzgecinden geçirin.
Hücre süspansiyonunu bir tüpe aktarın. Süpernatan içeren enzimleri santrifüjleyin ve çıkarın. Hücreleri bir tamponda yeniden askıya alın.
Anti-miyelin manyetik mikro boncuklar ekleyin. Bu mikro boncuklar, miyelin kalıntılarını ve oligodendrositleri bağlayarak miyelin proteinini hedef alır.
Hücre-boncuk karışımını, ferromanyetik kürelere sahip bir matris içeren bir tükenme sütununa yükleyin.
Uygulanan manyetik alan altında, mikroglial hücreler geçerken, mikroboncuklara bağlı miyelin kalıntıları ve oligodendrositler kolon içinde tutulur.
Sütunu tamponla yıkayın ve mikroglia
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin