JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:46 dk. • July 8th, 2025
Nörobazal bir ortamda fare embriyonik nöronal progenitör hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonu ile başlayın.
Ortam, hücre canlılığını korumak için gerekli besinleri içerir.
Bu hücre süspansiyonundan küçük damlaları, yapışkan olmayan bir kültür kabının kapağına dağıtın ve aralıklı olduklarından emin olun.
Kapağı ters çevirin, bu da asılı damlaların oluşmasına neden olur.
Ortamın buharlaşmasını önleyen nemli bir ortam oluşturmak ve inkübe etmek için kapağı bir tampon içeren tabağın üzerine yerleştirin.
Asılı damlaların içinde, sıvının yüzey gerilimi damlanın şeklini korur.
Bu şekil hapsi, hücreleri yayılmadan sınırlı bir alanla sınırlar.
Ek olarak, damlaların içindeki yerçekimi kuvvetleri hücreleri alt bölgeye doğru yönlendirir.
Nöronal progenitör hücreler daha yakın temas ettikçe, nöron topu olarak bilinen üç boyutlu bir yapı oluşturmak için kendiliğinden toplanırlar.
Nöron toplarını hazırlamak için, bu hücre süspansiyonundaki hücre yoğunluğunu NGB ortamı kullanarak mililitrede 1 milyon hücreye ayarlayın. Kültür kaplarının alt kısmına 7 mililitre PBS ekleyin. Kortikal nöronları, 10 santimetrelik kültür kaplarının üst kapakları içinde damla başına 10.000 hücre içeren 10 mikrolitrelik asılı damlalar olarak kültürleyin. Bulaşıkları, nöron topu oluşumuna izin vermek için nemlendirilmiş koşullar altında% 5 CO2 ile 37 santigrat derecede üç gün boyunca bir inkübatörde tutun.