İn Vitro Nöron ve Makrofaj Kokültürü Geliştirme
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:44 dk. • July 8th, 2025
Bir büyüme ortamında izole edilmiş murin dorsal kök ganglion nöronları ile başlayın.
Nöronal bağlanmayı teşvik etmek için bunları polimer kaplı çok kuyulu bir plakaya tohumlayın.
Daha sonra, disseke edilmiş ötenazi yapılmış bir fare alın ve buz gibi soğuk PBS'yi periton boşluğuna enjekte edin.
Makrofajları periton duvarından çıkarmak için peritona hafifçe masaj yapın.
Periton sıvısını toplamak için fareyi sıkın ve kirletici olarak görünen kırmızı kan hücrelerini seçici olarak parçalamak için bir lizis tamponu ile tedavi edin. Hücreleri bir kültür ortamında santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin.
Makrofajları, kültürlenmiş nöronları içeren kuyu içine yerleştirilmiş gözenekli bir eke aktarın.
Bu ko-kültür, nöronların ve makrofajların yakın mesafede olmasını sağlar.
Ko-kültürü db-cAMP ile muamele edin ve hücrelere girişini kolaylaştırmak için inkübe edin. Bu, sinyal moleküllerini salgılamak için nöronları aktive eder.
Bu sinyal molekülleri, db-cAMP ile birlikte, makrofajları pro-rejeneratif bir fenotipi benimsemeye ve nöronal büyüme için temel faktörleri salgılamaya teşvik eder.
Kültürü kurmadan önce, poli-D-lizin ve laminin ile 6 oyuklu bir plakayı önceden kaplayın. Daha sonra, 6 oy
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin