JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:32 dk. • July 8th, 2025
Çeşitli hücresel fonksiyonları düzenleyen bir sinyal molekülü olan siklik adenozin monofosfat veya cAMP ile başlayın. Bir nöron-makrofaj ko-kültürüne cAMP ekleyin.
Ortamdan gelen cAMP molekülleri ve nöronlardan gelen büyüme faktörleri makrofaj aktivasyonunu tetikler.
Aktive edilmiş makrofajlara sahip ek parçayı, bir makrofaj kültürü ortamı içeren başka bir kuyucuğa aktarın.
Burada, makrofajlar ortama sitokinler ve kemokinler salarlar ve şartlandırılmış bir ortam veya CM oluştururlar.
Hücresel bileşenleri peletlemek için CM'yi santrifüjleyin.
Hücresel kalıntıları gidermek için süpernatanı ve filtreyi aktarın.
Toplanan CM'yi bir nöronal kültüre ekleyin. Toplanan CM'deki sitokinler ve kemokinler nöron uzantılarını teşvik eder.
Hücreleri sabitlemek için soğutulmuş paraformaldehit ekleyin.
Antikorların spesifik olmayan bağlanmasını önlemek için bir bloke edici tampon ekleyin. Kalan tamponu çıkarmak için yıkayın.
Nöronların hücre iskeleti proteinlerini hedef alan birincil antikorları uygulayın. Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Primer antikorlara bağlanan kırmızı florofor konjuge ikincil antikorlar ekleyin. Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Floresan mikroskobu k
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin