JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:35 dk. • July 8th, 2025
İç kulağın özel yapıları olan spiral ganglion ve Corti organını içeren disseke bir fare iç kulak segmenti ile başlayın.
Corti organı, işitsel sinyaller için reseptör görevi gören saç hücrelerini içerir.
Spiral ganglion, Corti organının saç hücrelerini innerve etmek için süreçleri uzatan nöron hücre gövdelerinden oluşur.
Spiral ganglionu Corti organından ayırın ve ondan küçük doku bölümleri veya eksplantlar elde edin.
Şimdi, kültür ortamı içeren hücre dışı matris kaplı bir çoklu elektrot dizisi alın.
Eksplantları diziye yerleştirin ve Corti organını elektrot alanının dışına yerleştirin. Kuluçkaya yatmak.
Eksplantlar, kaplanmış çok elektrotlu yüzeye yapışır.
Düzenli olarak serum proteinleri ve büyüme faktörleri içeren ortamlar ekleyin.
Kültürleme sırasında, medya bileşenleri ve Corti organı, multielektrot üzerinde spiral ganglion nöronlarından nörit büyümesini teşvik ederek nörotrofik destek sağlar.
Spiral ganglionun bazal kısmını ve Corti organını forseps ile tutarak ve Corti organını tabandan tepeye doğru yavaşça çözerek Corti organını modiolustaki spiral gangliondan ayırın. Daha sonra, forseps veya ince mikrodiseksiyon makası veya bıçağı kullanarak spiral gangliondan lateral eksplantları kesin.
Şimdi, spiral ganglion eksplantlarını ve Corti organını MEA'ya aktarın. Ardından, SG eksplantlarını elektrot alanı ve Corti organı üzerine, elektrot alanından yaklaşık 5 milimetre uzağa yerleştirin. Dokuya zarar vermekten kaçınarak eksplantları ve Corti organını MEA'ların üzerine yerleştirin. Daha sonra, MEA'ları dikkatlice inkübatöre yerleştirin ve 37 santigrat derece ve% 5 CO2'de kültürleyin.
Ertesi gün, eksplantları MEA'lara bağlanmaları açısından görsel olarak inceleyin. Ardından, art arda beş gün boyunca günlük% 10 FBS ve BDNF içeren 100 mikrolitre kültür ortamı ekleyin. 6. günde,% 10 FBS ve mililitre BDNF başına 5 nanogram içeren 2 mililitre kültür ortamı ekleyin ve dokuyu 13 gün daha kültürleyin.